利用CRISPR/Cas9技术创制烟草NtabMYC2基因的定点突变

发布时间：2021-10-12 14:18

　　本研究利用CRSIPR/Cas9基因编辑技术,创制了NtabMYC2的不同的定点突变材料。针对NtabMYC2基因3个敲除靶位点,设计并成功构建了相应的载体。结果表明:3个载体转化烟草后,通过测序验证NtabMYC2基因被成功敲除了,统计3个载体的敲除成功率分别是24%、2%、10%;T0突变植株经过自交重组产生T1代植株,通过测序分析T1代植株存在4种纯合的NtabMYC2基因突变类型,其分别是多一个A、T、C插入突变和一个缺失4个碱基缺失突变。为进一步研究NtabMYC2基因在烟草中的功能提供了一定的参考价值。 

【文章来源】：分子植物育种. 2017,15(06)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 Ntab MYC2基因靶位点序列验证
    1.2 Ntab MYC2基因敲除载体构建
    1.3 Ntab MYC2转基因烟株的检测
    1.4 Ntab MYC2基因定点敲除序列检测
    1.5 Ntab MYC2基因定点敲除材料的突变类型分析
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 材料和试剂
    3.2 材料处理
    3.3 烟草Ntab MYC2基因序列的来源
    3.4 p ORE-CRISPR/Cas9表达载体构建
    3.5 p ORE-CRISPR/Cas9表达载体的农杆菌转化及烟草的遗传转化
    3.6 转基因烟株筛选及Ntab MYC2基因突变位点的检测


【参考文献】：
期刊论文
[1]Targeted Mutagenesis in Zea mays Using TALENs and the CRISPR/Cas System[J]. Zhen Liang,Kang Zhang,Kunling Chen,Caixia Gao.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(02)



本文编号：3432744