南极真菌产褐藻胶裂解酶Aly-i7的基因克

发布时间：2021-10-13 08:43

　　南极是人类共有的资源宝库,含有多种矿物质资源的同时也蕴含着丰富的生物资源。南极地区生存环境恶劣,低温、酷寒、高盐、昼夜温差大、紫外辐射强等因素使得该地区大型生物种类单一,但微生物独特的生理特性及代谢机制使得其能够在南极地区大量生存、繁衍,对该地区微生物进行研究,不但可以发掘许多未知的微生物种群,丰富微生物基因库,还可以获得多种功能独特的生物活性物质。本文以产褐藻胶裂解酶的南极真菌Aspergillus sp.22-5为研究对象,采用基因工程技术克隆获得褐藻胶裂解酶基因（Aly-i7）并进行异源表达,纯化并研究了重组褐藻胶裂解酶（Aly-i7）的酶学性质,同时对其降解产物在农业领域的应用潜力进行了初步探索,为酶法降解褐藻胶以及褐藻寡糖在农业上的应用提供了科学依据。本文利用褐藻酸钠为唯一碳源培养基,对南大洋沉积物样品中的菌落进行了选择性培养和筛选,共分离获得10株具有褐藻胶降解能力的真菌,种属鉴定表明,其中有红酵母属（Rhodotorula sp.）4株,青霉菌属（Penicillium sp.）3株,曲霉属（Aspergillus sp.）3株。本文以酶活力最高的曲霉菌Aspergill... 

【文章来源】：青岛科技大学山东省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 褐藻胶
        1.1.1 褐藻胶简介
        1.1.2 褐藻胶的应用
    1.2 褐藻寡糖
        1.2.1 褐藻寡糖简介
        1.2.2 褐藻寡糖的制备方法
        1.2.3 褐藻寡糖的生物活性
        1.2.4 褐藻寡糖的纯化
    1.3 褐藻胶裂解酶
        1.3.1 褐藻胶裂解酶简介
        1.3.2 褐藻胶裂解酶的来源
        1.3.3 褐藻胶裂解酶的分类
        1.3.4 褐藻胶裂解酶的活性测定方法
        1.3.5 褐藻胶裂解酶的应用
    1.4 本研究的意义
第2章 南极真菌产褐藻胶裂解酶菌株的筛选与鉴定
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料来源
        2.1.2 主要试剂及配制
        2.1.3 培养基及成分
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 产褐藻胶裂解酶菌株的筛选
        2.1.6 褐藻胶裂解酶活力测定
        2.1.7 褐藻胶裂解酶活性菌株的种属鉴定
    2.2 实验结果
        2.2.1 初筛及复筛结果
        2.2.2 DNS法测定褐藻胶酶活结果
        2.2.3 褐藻胶裂解酶菌株的种属鉴定结果
    2.3 讨论
    2.4 小结
第3章 南极真菌褐藻胶裂解酶基因的克隆及表达
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 试验用缓冲液配制
        3.1.3 培养基
        3.1.4 SDS-PAGE电泳
        3.1.5 工程菌的构建
        3.1.6 重组蛋白的诱导表达及纯化
        3.1.7 诱导表达条件的优化
    3.2 实验结果
        3.2.1 褐藻胶裂解酶基因Aly-i7的序列分析
        3.2.2 南极真菌藻胶裂解酶基因Aly-i7的克隆
        3.2.3 重组质粒的双酶切鉴定
        3.2.4 重组酶的诱导表达与蛋白纯化
        3.2.5 重组酶的诱导表达条件优化
    3.3 讨论
    3.4 小结
第4章 重组褐藻胶裂解酶的酶学性质研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 出发菌株与培养基
        4.1.2 实验试剂及配制
        4.1.3 实验设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 底物选择性
        4.2.2 温度对褐藻胶裂解酶Aly-i7的影响
        4.2.3 pH对褐藻胶裂解酶Aly-i7的影响
        4.2.4 不同金属离子对Aly-i7的酶活力影响
        4.2.5 Aly-i7的酶解产物分析
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 Aly-i7的底物选择性
        4.3.2 Aly-i7最适反应温度
        4.3.3 Aly-i7的热稳定性
        4.3.4 Aly-i7最适pH
        4.3.5 Aly-i7的pH稳定性
        4.3.6 金属离子对Aly-i7的酶活力影响
        4.3.7 Aly-i7的产物分析
    4.4 讨论
    4.5 小结
第5章 褐藻寡糖对黄瓜白粉病的防治效果研究
    5.1 实验材料
        5.1.1 菌种与培养基
        5.1.2 主要试剂和材料
        5.1.3 主要仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 褐藻寡糖的制备及药剂配制
        5.2.2 褐藻寡糖对黄瓜白粉病菌的毒力测定
        5.2.3 褐藻寡糖防治黄瓜白粉病的盆栽实验
    5.3 结果与分析
        5.3.1 褐藻寡糖的室内毒力测定结果
        5.3.2 5%褐藻寡糖对黄瓜白粉病的盆栽防效实验
    5.4 讨论
    5.5 小结
第6章 总结与展望
    6.1 总结
    6.2 展望
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]褐藻胶裂解酶的基因克隆及表达条件优化[J]. 许超,黄桂媛,王巧贞,卢明倩,张荣灿,廖威,张云开,黄庶识.  中国酿造. 2017(12)
[2]褐藻制备生物乙醇的生产优化研究[J]. 郗欣彤,毛绍名.  中国生物工程杂志. 2017(12)
[3]高效褐藻胶降解菌的筛选与产酶条件优化[J]. 李婷婷,陈倩,石萍,耿旭.  北京大学学报(自然科学版). 2017(06)
[4]南极普里兹湾海绵共附生放线菌的分离及其次级代谢潜力评估[J]. 官颖颖,于雪,张海雷,张宁,李静.  中国海洋药物. 2017(05)
[5]产褐藻胶裂解酶菌株HB12274的鉴定和发酵优化[J]. 高王宇,黄惠琴,刘敏,朱军,鲍时翔.  基因组学与应用生物学. 2018(10)
[6]一株明亮发光杆菌产褐藻胶裂解酶的培养基优化[J]. 刘彩琴,王楠,陈薇青,金建昌,项丽艳.  食品工业科技. 2017(08)
[7]褐藻胶裂解酶基因的克隆表达及重组酶酶学性质[J]. 韩伟,林娟,谢勇,徐凡,叶秀云.  微生物学通报. 2017(05)
[8]基于高通量测序的冷冻南极磷虾中细菌菌群结构分析[J]. 江艳华,姚琳,李风铃,郭莹莹,朱文嘉,王联珠.  食品安全质量检测学报. 2016(07)
[9]微泡菌属ALW5褐藻胶裂解酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性[J]. 吴丽云,倪辉,李鹤宾,肖安风,蔡慧农,朱艳冰.  中国食品学报. 2016(06)
[10]一株转化琼胶为新琼寡糖菌株的筛选及鉴定[J]. 韩军萍,黄雅燕,叶静,肖美添.  微生物学报. 2015(09)

硕士论文
[1]云南部分温泉嗜热微生物的多样性及嗜热酶的研究[D]. 杨越.云南大学 2012



本文编号：3434326