绵羊肺炎支原体膜蛋白p74基因的克

发布时间：2021-10-15 14:57

　　【方法】利用PCR方法对绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）新疆分离株MO-XJ p74基因进行扩增、克隆及测序,分析其分子特征。将P74蛋白抗原集中区编码序列亚克隆至表达载体p ET-32a（+）,构建重组表达载体p ET-32a（+）-p74C,转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中,IPTG诱导表达。【结果】MO-XJ p74基因全长2016 bp,编码671个氨基酸;对编码的氨基酸序列分析发现,该蛋白不含信号肽序列,9³1位氨基酸序列含有1个跨膜区,有16个N-糖基化位点、7个N-酰基化位点、17个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点及5个蛋白激酶C磷酸化位点。同源性分析显示MO-XJ P74蛋白氨基酸序列与标准株MO-SC01氨基酸序列同源率为86.5%,其羧基端为P74蛋白抗原集中区。SDS-PAGE检测结果显示,表达的P74蛋白抗原表位集中区片段对分子质量约为35.5 k Da,与理论值相符;Western blot分析表明重组P74蛋白具有较强的反应原性。【结论】本研究为进一步筛选MO亚单位疫苗及血清学诊断的候选抗... 

【文章来源】：西南农业学报. 2017,30(05)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株与试剂
    1.2 引物设计
    1.3 MO-XJ p74基因的扩增、克隆及测序鉴定
    1.4 p74基因及其编码蛋白质生物信息学分析
    1.5 P74蛋白氨基酸序列同源性及遗传进化分析
    1.6 p74基因编码蛋白羧基端抗原集中区的扩增、克隆及鉴定
    1.7 原核表达载体构建
    1.8 目的蛋白的诱导表达及Western blot分析
2 结果与分析
    2.1 p74基因的扩增、克隆及测序鉴定
    2.2 p74基因核苷酸及编码氨基酸序列分析
    2.3 P74蛋白氨基酸序列同源性及遗传进化分析结果
    2.4 p74基因编码蛋白羧基端抗原集中区的扩增、克隆及鉴定结果
    2.5 重组表达载体p ET-32a (+) -p74C构建与鉴定结果
    2.6 P74C蛋白的诱导表达结果
    2.7 表达产物Western blot鉴定结果
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]绵羊肺炎支原体膜蛋白p56基因的克隆、表达及反应原性研究[J]. 陈诚,乔军,孟庆玲,刘田莉,胡政香,马玉,才学鹏,陈创夫.  西南农业学报. 2016(02)
[2]绵羊肺炎支原体p128基因序列分析及原核表达[J]. 冯旭飞,刀筱芳,张贤宇,李定霏,杨发龙.  中国兽医杂志. 2015(02)
[3]绵羊肺炎支原体贵州分离株的鉴定[J]. 张双翔,程振涛,周碧君,文明,王开功,李泽民,王慧,崔亚兰,覃岚,夏鹏.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(05)
[4]中国部分地区绵羊肺炎支原体的基因多态性分析[J]. 许健,储岳峰,赵萍,高鹏程,贺英,剡根强,逯忠新.  畜牧兽医学报. 2011(09)
[5]绵羊肺炎支原体两分离株的药物敏感实验[J]. 陈宏伟,剡根强,张秀萍.  石河子大学学报(自然科学版). 2005(02)
[6]外源基因在大肠杆菌中的高效表达[J]. 廖美德,谢秋玲,林剑,洪岸,孙奋勇.  生命科学. 2002(05)
[7]一种由支原体感染的绵羊增生性间质性肺炎的研究[J]. 胡景韶,蒋学良,胡诚隆,张道永.  中国兽医杂志. 1982(05)

硕士论文
[1]绵羊肺炎支原体新疆塔城流行株的分离鉴定及油佐剂灭活苗免疫原性初步研究[D]. 胡政香.石河子大学 2015
[2]绵羊肺炎支原体多表位疫苗的研究及免疫试验[D]. 张轩.中国农业科学院 2013



本文编号：3438166