内含子、polyA对CHO细胞表达系统转基因表达的影响

发布时间：2021-10-18 11:37

　　背景目前,全世界治疗性重组蛋白（包括重组抗体）的生产近70%是用中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）细胞表达系统生产的。影响重组蛋白在CHO细胞中高效且稳定表达的因素很多,其中表达载体是其中最重要的因素之一。由于目的基因转入后的随机整合,以及基因沉默和不稳定表达的经常发生,限制了大规模工业化生产的发展。因此高效稳定表达载体的构建已经成为国内外学者研究的热点。目的探究不同内含子元件和polyA元件对CHO细胞转基因表达水平及稳定性的的影响及其机制。方法1.根据文献报道的内含子序列hCMV intron A（hCMVI）、TPL intron（TPLI）、SV40 intron（SVI）、CHEF1 gene intron1（CHEFI）,PCR扩增或人工合成内含子片段替换原表达载体pIRES-EGFP中内含子IVS,构建含不同内含子的表达载体。2.根据文献报道的polyA序列（BGH polyA、Mutation BGH polyA、Synthetic polyA、HSV TK polyA、SV40 late polyadenylation signal）,... 

【文章来源】：新乡医学院河南省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同内含子表达载体构建示意图

图 1-2 细胞转染效率和转染效率与载体大小关系。接着观察不同内含子元件对瞬时基因表达的影响，流式检测 eGFP 的发现瞬时表达最高的是转染 SVI（MFI=5.2×104）的载体，其次为 IVSIVI 和 CHEFI（4.3×104、3.6×104、2.8×104、1.5×104）的载体。且转染 和 TPLI 的载体细胞中 eGFP 瞬时表达明显高于 hCMVI 和 CHEFI(P<3)。

图 1-2 细胞转染效率和转染效率与载体大小关系。接着观察不同内含子元件对瞬时基因表达的影响，流式检测 eGFP 的表达，结果发现瞬时表达最高的是转染 SVI（MFI=5.2×104）的载体，其次为 IVSI、TPI、hCMVI 和 CHEFI（4.3×104、3.6×104、2.8×104、1.5×104）的载体。且转染 SVI、IVSI 和 TPLI 的载体细胞中 eGFP 瞬时表达明显高于 hCMVI 和 CHEFI(P<0.0 5；图 1-3)。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3442731