三色堇小分子热激蛋白基因克隆及表达分析

发布时间：2021-10-20 20:48

　　三色堇（Viola tricolor）花色丰富、花期长且耐寒,为世界知名的花坛花卉。但三色堇忌酷热,较难适应我国夏季高温气候条件,导致夏季育苗难、观赏期缩短。发掘耐热基因对了解其热响应机制具有重要意义。热激蛋白（HSP）是热响应蛋白的重要组成部分,小分子热激蛋白（sHSP）是热激蛋白家族最重要的蛋白之一。本试验以三色堇耐热自交系DFM-16在42℃热激处理1 h、2 h的转录组数据为背景,为了研究热胁迫下不同材料在不同时间段的表达情况,对三色堇小分子热激蛋白基因家族进行定量及序列分析,为进一步了解三色堇小分子热激蛋白基因的结构及功能对其进行克隆及表达载体构建。研究结果如下:1.基于三色堇热胁迫转录组分析结果,筛选出15个sHSP基因。采用实时荧光定量PCR分别对15个sHSP基因在2份材料42℃处理1 h,2 h,6 h,12 h表达情况进行了分析。结果表明,15个sHSP基因均受热胁迫诱导,为三色堇热响应基因。耐热材料DFM-16在热激下的转录水平和对照相比表达最高峰主要集中在1 h和12 h,12 h仍然无明显回落趋势。热敏材料08H在热激下的转录水平和对照相比表达最高峰主要集中在... 

【文章来源】：河南科技学院河南省

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

三色堇叶片总RNA电泳检测Fig.2-1AgrosegelelectrophoresisanalysisoftotalRNAofpansyleaf

17.9-2 TCCTGAGCCCAAGAAACC CAAACATCACAGAACGAP18.1 CTCCACCTCCACTTTCACTT AATGCACCAAACTCCP18.2 TCCCACTGCTCCGCTCCATC TTCTGCATTTGTGAACP22-1 TCGCTCGGTCAATCGTCT GCTTCCAGGGAACTAP22-2 CCCGCCCATAATCTCCTA GGTGGTGCCGAAAGTSP24 TTCGAGCAAACACTACCC AAAGTCCTGCCCAAAP26.3 GGTGGAAGTAAGAAGACGACG GGAAACTCCTCCGAC26.4-1 ATGCAATCGGCAGGGAGT CAAGGCAACCAAGGA26.4-2 TAGCACCGGCAAACAGAG GTGAAGGCGGAGATG DFM-16 和 08H 热激处理 2 h 的 cDNA 为模板通过 PCR 对 15 对引检测，PCR 产物经 1%琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示所有引物均特异性条带（图 2-2），可以用于后续荧光定量 PCR 试验。

24图 2-3 sHSP 家族基因在不同热激Fig.2-3 Quantitative analysis of sHSP family ge注：a:VtHSP1; b:VtHSP17-1; c:VtHSP17-2g:VtHSP17.9-2; h:VtHSP18.1; i:VtHl:VtHSP24 ;m:VtHSP26.3; nVtHSP17-2 和 VtHSP22-1 基因在耐VtHSP17-2 的表达模式为，1 h 升高 2 h o

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]过量表达LeHSP21.5减缓番茄的UPR应答并增强其耐逆性[D]. 赵春梅.山东师范大学 2006

硕士论文
[1]三色堇耐热资源初步筛选与热激蛋白70基因表达分析[D]. 陈宏志.河南科技学院 2016
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[3]玉米响应高温和干旱复合胁迫的数字基因表达谱分析及ZmsHSP17.7基因的功能分析[D]. 葛淑娟.山东农业大学 2014
[4]低温解除百合鳞茎休眠过程中抑制性差减cDNA文库构建及EST分析[D]. 马春莲.华中农业大学 2012
[5]陆地棉热激蛋白基因sHSP7和sHSP8的克隆及功能分析[D]. 葛晓阳.南京农业大学 2012
[6]辣椒小分子热激蛋白基因CaHSP24的克隆和表达分析[D]. 朱巍.西北农林科技大学 2011



本文编号：3447578