CRTC1-CREB调控自噬基因的兴奋转录对AMPA受体的內吞具有重要作用

发布时间：2021-10-21 20:32

　　背景:环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein,CREB）及其转录共激活因子1（CREB-regulated transcription coactivator 1,CRTC1）广泛表达于大脑,两者作为转录因子能够响应神经元活动激活相关基因的转录,进而在转录依赖的突触可塑性的维持过程中发挥重要作用。有研究发现,长时程（LTP）增强能诱导CRTC1入核,与CREB一同介导即早基因如c-fos,Arc,BDNF的转录,维持长时程增强。另外CREB在维持LTD中具也有重要作用,而CRTC1在LTD中的作用尚不清楚。CRTC2是CRTC1的直系同源基因,在小鼠肝脏细胞中可以介导自噬相关基因的转录,生物信息学分析提示两者的功能可能具有保守性,所以CRTC1在神经元中可能介导自噬相关基因的转录。在神经元发生LTD过程中,突触蛋白和AMPA受体的降解对神经元维持LTD具有重要作用。因此,我们想探究CRTC1在cLTD的刺激条件下是否入核,以及是否介导自噬相关基因的转录以降解AMPA受体。目的:检测CRTC1在cLTD的刺激下是否入核调控自噬... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

cLTD促进神经元自噬水平上升诱导原代培养天的神经元产生，小时后收样，用蛋白质免疫印迹法

浙江大学硕士学位论文实验结果20自噬是自噬囊泡包裹待降解物送至溶酶体降解的过程，即自噬流[24]。溶酶体内部是一个酸性的环境，GFP的荧光在酸性环境中容易淬灭，而mCherry的荧光在酸性环境中则不易淬灭[25]。为了进一步直观地检测神经元发生cLTD时自噬囊泡的变化情况，我们构建mCherry-GFP-LC3的过表达质粒，通过慢病毒包装感染的方式在原代培养的神经元中过表达mCherry-GFP-LC3，LC3可以结合自噬底物将其附着在自噬囊泡上，所以自噬体中同时存在mCherry和GFP，其囊泡呈现黄色；溶酶体中GFP被淬灭，只保留mCherry，呈现红色。我们将能过表达mCherry-GFP-LC3的病毒感染原代培养10天左右的神经元，4天后诱导神经元发生cLTD，2小时后固定封片，通过共聚焦显微镜拍摄神经元中的荧光。实验结果如图1.3所示，cLTD可引起神经元树突和胞体中的GFP和mCherry的点数显著增加，这表明cLTD可诱导神经元产生更多的自噬囊泡，自噬囊泡更多地与溶酶体结合。图1.3cLTD可诱导神经元产生自噬囊泡

cLTD可以诱导CRTC1与CREB形成复合体


本文编号：3449676