微RNA-129-5p靶向Fas相关死亡功能域蛋白基因对体外培养人椎间盘髓核细胞凋亡的影响

发布时间：2021-10-21 22:09

　　目的研究微RNA-129-5p（miR-129-5p）靶向Fas相关死亡功能域蛋白（FADD）基因对人椎间盘髓核细胞（hNPC）凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法运用脂质体法将miR-219-5p抑制子转染至hNPC中抑制miR-219-5p表达,将pcDNA-FADD转染至hNPC中使FADD过表达,将miR-219-5p抑制子和FADD siRNA共转染至hNPC中抑制miR-219-5p和FADD表达。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测抑制miR-219-5p表达后hNPC细胞中FADD、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、Bcl-2和Bax蛋白表达量。通过Targetscan软件预测miR-129-5p和FADD靶向结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验检测二者的靶向关系。结果抑制miR-219-5p、过表达FADD均可明显促进hNPC凋亡。Targetscan软件预测发现FADD 3′-UTR上存在miR-219-5p的结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实miR-129-5p和FADD具有靶向结合关系。抑制miR-219-5p的表达后,hNPC中FADD表... 

【文章来源】：脊柱外科杂志. 2020,18(03)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

过表达FADD诱导hNPC凋亡

实时荧光定量PCR检测结果显示,anti-miR组hNPC中miR-129-5p的表达量与anti-miR-con组相比明显降低(P < 0.05,图1),表明miR-129-5p的表达被成功抑制。流式细胞术检测结果显示,与anti-miR-con组相比,anti-miR组hNPC的凋亡率明显升高(P < 0.05,图2)。蛋白质印迹分析结果显示,与anti-miR-con组相比,anti-miR组hNPC中促凋亡相关蛋白活化型Caspase-3表达上调(P < 0.05),抑凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调(P < 0.05),Bax蛋白表达量无明显变化(图3),结果表明抑制miR-129-5p表达能明显促进hNPC凋亡。图2 流式细胞术检测抑制mi R-129-5p表达后h NPC的凋亡率

流式细胞术检测抑制mi R-129-5p表达后h NPC的凋亡率

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]间充质干细胞来源外泌体促进椎间盘退变修复的作用及机制研究[D]. 徐辰.第二军医大学 2017
[2]miR-129-5p在椎间盘退变中的作用及其表观遗传调控研究[D]. 陈宇飞.第四军医大学 2014

硕士论文
[1]LncRNA在椎间盘退变过程中调控髓核细胞凋亡的功能及其机制研究[D]. 王毅峰.第二军医大学 2016
[2]Fas/FasL信号转导通路在镉致神经细胞凋亡中的作用及NAC的保护效应[D]. 张雅静.扬州大学 2016



本文编号：3449806