Wnt3基因在结直肠癌发病中的作用机制研究

发布时间：2021-10-22 13:42

　　背景Wnt3是19种Wnt信号蛋白家族成员之一,大量文献报道Wnt3的异常表达通过激活经典Wnt信号通路调控多种人类恶性肿瘤的发生发展。结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是全世界范围内最常见和对人类健康威胁最大的消化道恶性肿瘤,其发生发展机制目前尚不十分清楚。因此,探究Wnt3基因在结直肠癌发病过程中的分子机制是十分必要的。目的检测Wnt3基因在CRC组织及癌旁正常组织中的表达情况;探究Wnt3基因对CRC细胞的增殖能力、迁移能力、体内外成瘤能力以及对细胞周期和药物敏感性的影响;探究Wnt3基因促进CRC发病发展的内在分子机制。方法1.通过qRT-PCR和Western blot,分析Wnt3基因在CRC组织及癌旁正常组织中的表达情况。2.构建稳定过表达或敲低Wnt3基因的CRC细胞系:a)转染细胞:构建可以特异性靶向Wnt3 mRNA的shRNA质粒和过表达Wnt3的pEX4质粒并进行扩增保存,转染HCT-116细胞。b)筛选细胞:用高浓度G418药物持续筛选。c)细胞鉴定:通过qRT-PCR鉴定Wnt3 mRNA的表达水平与预期一致,而且在蛋白质表达水平也与预期... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
引言
1．材料、试剂、仪器
    1.1 实验材料
    1.2 购买试剂
    1.3 配制试剂
    1.4 主要仪器
2．实验方法及步骤
    2.1 质粒提取
    2.2 细胞培养
    2.3 稳定表达的CRC细胞筛选
    2.4 单克隆细胞HCT-116 筛选
    2.5 RNA提取、c DNA反转录和q RT-PCR
    2.6 蛋白样品制备
    2.7 Western blot
    2.8 细胞增殖实验
    2.9 细胞划痕实验
    2.10 细胞集落形成实验
    2.11 细胞周期和凋亡实验
    2.12 顺铂药物敏感性试验
    2.13 裸鼠肿瘤形成实验
    2.14 统计分析
3．实验结果
    3.1 Wnt3基因在CRC组织及细胞系中过表达
    3.2 筛选稳定过表达和敲低Wnt3基因的HCT-116 单克隆细胞
    3.3 过表达Wnt3基因促进CRC细胞的增殖，迁移和肿瘤生长
    3.4 过表达Wnt3基因激活经典Wnt信号通路并降低CRC细胞对化疗药物的敏感性
    3.5 敲低Wnt3基因抑制了CRC细胞的增殖，迁移和肿瘤生长
    3.6 敲低Wnt3基因阻滞细胞周期并促进顺铂诱导的CRC细胞凋亡
    3.7 敲低Wnt3基因抑制经典Wnt信号通路并增强CRC细胞对顺铂的敏感性
    3.8 敲低Wnt3基因在经典Wnt信号通路中通过c-Myc抑制糖酵解
4．讨论
5．结 论
参考文献
综述 Wnt信号蛋白家族成员与结直肠癌发病的关系
    参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Colorectal cancer screening: An updated review of the available options[J]. Iyad A Issa,Malak Noureddine.  World Journal of Gastroenterology. 2017(28)
[2]Colorectal cancer population screening programs worldwide in 2016: An update[J]. Mercedes Navarro,Andrea Nicolas,Angel Ferrandez,Angel Lanas.  World Journal of Gastroenterology. 2017(20)
[3]Wnt3a:functions and implications in cancer[J]. Sha He,Yi Lu,Xia Liu,Xin Huang,Evan T.Keller,Chao-Nan Qian,Jian Zhang.  Chinese Journal of Cancer. 2015(12)



本文编号：3451215