新生儿感染埃可病毒11型临床、基因特征及分子检测方法

发布时间：2021-11-03 03:47

　　背景感染是导致新生儿死亡的重要原因,住院患儿因免疫系统不成熟、使用广谱抗生素、接受侵入性外科操作等因素影响,容易发生医院获得性感染,尤其在新生儿重症监护病房（Neonatal Intensive Care Unit,NICU）内,医院获得性感染与患儿的发病率和死亡率显著相关。本实验室长期对我院就诊患者进行发热呼吸道症候群、发热出疹症候群和腹泻症候群病原谱的监测,其中80%为儿童,包括新生儿。在监测工作中发现,2019年5～7月集中检出来自我院NICU 7例埃可病毒11型（echovirus 11,EchoV 11）阳性样本。EchoV 11属于B组肠道病毒,多数致死性肠道病毒感染由EchoV 11所致。1977年至今,国外已报道多起新生儿病房内EchoV 11的暴发,死亡率高;国内目前多为散发病例,近年也开始出现新生儿院内感染的隐患,但尚未引起广泛关注。目前临床常用的EchoV 11检测方法是利用多聚酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增VP1区序列后进行测序鉴定,该方法检测周期较长（约2～3天）,国内外目前还未有针对EchoV 11的快速分子检测... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?－２?ＥｃｈｏＶ?１１感染患儿住院时间段??Ｆｉｇ．?１－２?Ｄｕｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ｃｈｉｌｄｒｅｎ?ｗｉｔｈ?ＥｃｈｏＶ?１１?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??

双峰，阴??性对照孔在７８°Ｃ左右出现非特异性峰值，故引物浓度为ｌ．Ｏ＾Ｍ时ＰＣＲ反应特异性??欠佳，不应设置为最佳反应浓度。??针对阳性样本３个复孔扩增曲线的重复性，在０．２？０．８＾Ｍ引物浓度中，浓度为??０．４ｐＭ吋重复性最好；针对扩增曲线的荧光强度，在０．２？０仰Ｍ引物浓度中，浓??度为０．２ｐＭ或０．６ｐＭ吋荧光强度最高；针对扩增曲线的Ｃｔ值，弓丨物浓度为０．２＿??时Ｃｔ值在２０左右，引物浓度为０．４？０．８ｐＭ时Ｃｔ值均为１８左右。不同引物浓度的熔??解曲线综合展示见图２－３。??Ｍｅｌｔ?Ｃｕｒｖｅ?Ｐｌｏｔ??。５?２??ｒ：：??ｉ?－?／１??ｉ?／?１??＼＿＿＿??０５?〇?７０?０?７５?〇?８０?０?８Ｓ?０?ＭＯ?０９?０??Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?（＾Ｃ）??图２－３引物浓度０．２－１你Ｍ?ＰＣＲ反应熔解曲线??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?ＰＣＲ?Ｍｅｌｔ?ｃｕｒｖｅ?ｐｌｏｔ?ｗｉｔｈ?ｐｒｉｍｅｒ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?０．２－１．０?｜ｉＭ??４７??

?第二章ＥｃｈｏＶ?１１荧光定量ＰＣＲ检测方法的建立???ｃｏｐｉｅｓ／｜ｉｌ、１０?ｃｏｐｉｅｓ／（ｉｌ＞?１０２?ｃｏｐｉｅｓ／（ｉｌ、１０３?ｃｏｐｉｅｓ／｜ｉＫ?１０４?ｃｏｐｉｅｓ／｜ｉｌ、１０５?ｃｏｐｉｅｓ／｜ｉＫ??１０６?ｃｏｐｉｅｓ／ｊｘｌ、１０７?ｃｏｐｉｅｓ／（ｉｌ、１０８?ｃｏｐｉｅｓ／ｊｘｌ、１０９?ｃｏｐｉｅｓ／ｐｌ系列浓度的标准品。??图２－６?ＥｃｈｏＶ?１１?ＶＰ１完整区域扩增产物琼脂糖凝胶电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－６?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＥｃｈｏＶ?１１?ＶＰ１?ｃｏｍｐｌｅｔｅ??ｓｅｑｕｅｎｃｅ??注：电泳条带从左至右依次为Ｍ?（ＤＮＡＭａｋｅｒＢ５００３５１：?１００？５０００ｂｐ）；?１、２?（９５１２８病毒液??扩增产物），扩增产物片段长约１４００ｂｐ。??图２－７?ＴＡ克隆插入片段扩增产物琼脂糖凝胶电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－７?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＴＡ?ｃｌｏｎｅ?ｉｎｓｅｒｔ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??注：电泳条带从左至右依次为Ｍ?（ＤＮＡＭａｋｅｒＢ５００３５１：?１００？５０００ｂｐ）；?１?（ＴＡ克隆插入片??段扩增产物），扩增产物片段长约ＭＯＯｂｐ。??５２??


本文编号：3472982