黄河裸裂尻鱼MSTN基因RNA干扰研究

发布时间：2021-11-03 13:17

　　目的利用反义寡合甘酸技术抑制肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）的表达,评估MSTN基因的沉默效果,并检测RNA干扰后对下游基因的影响。方法通过构建黄河裸裂尻鱼（Schizopygopsis pylzovi）MSTN基因RNA干扰（RNAi）重组腺病毒载体1P3（DSP MSTN 273+250+1737）和1P2（DSP MSTN 195+1670）,并将其注射黄河裸裂尻鱼肌肉组织,进行活体RNA干扰;利用real-time PCR和Western blotting评估MSTN基因的沉默效果,并检测MSTN基因RNA干扰后肌肉肌酸激酶（muscle-type creatine kinase,M-CK）基因转录水平的调控作用。结果real-time PCR分析结果表明,与HK组（病毒通用阴性对照组）和N组（空白对照组）相比,重组腺病毒载体1P3对黄河裸裂尻鱼肌肉MSTN基因的转录具有明显的干扰作用（P<0.05）,抑制率达53.5%;而重组腺病毒载体1P2对MSTN基因的转录无明显干扰作用（P>0.05）。Western-blotting分析结果与real-tim... 

【文章来源】：中国实验动物学报. 2016,24(04)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 样本采集
        1.1.2 主要仪器与试剂
    1.2 方法
        1.2.1 构建shRNA重组腺病毒载体
            (1)干扰质粒的构建
            (2)包装腺病毒载体
        1.2.2 黄河裸裂尻鱼活体注射重组腺病毒
        1.2.3 Real-time PCR检测RNA干扰后MSTN基因表达以及对下游基因M-CK的影响
        1.2.4 Western-blotting检测RNA干扰后MSTN基因的表达量
2 结果与分析
    2.1 腺病毒载体的构建
        2.1.1 shRNA干扰载体的构建
        2.1.2 包装重组腺病毒
    2.2 Real-time PCR检测黄河裸裂尻鱼RNA干扰后MSTN的相对表达量
    2.3 Western-blotting测定RNA干扰对MSTN蛋白相对表达情况
    2.4 Real-time PCR检测黄河裸裂尻鱼MSTN基因RNA干扰后对下游基因M-CK的表达调控
3 讨论



本文编号：3473754