利用2型重组腺相关病毒抑制子宫腔上皮Plekhs1基因表达对小鼠生育能力的影响

发布时间：2021-11-05 04:39

　　研究构建稳定表达Plekhs1 shRNA 2型重组腺相关病毒载体（rAAV2-GFP-shRNA-Plekhs1）,筛选并制备抑制Plekhs1表达效果最强重组腺相关病毒（rAAV2-PL3）。重组病毒子宫角注射到小鼠子宫,通过Real-time PCR、荧光检测、免疫组化技术检测rAAV2-PL3在小鼠子宫侵染表达规律,分析rAAV2-PL3侵染小鼠子宫抑制Plekhs1表达效果及对生殖影响。结果表明,rAAV2-PL3可有效转染至小鼠子宫内膜上皮细胞中并抑制Plekhs1表达,F1代产仔数量显著降低。研究表明,子宫角注射重组腺相关病毒可高效研究子宫腔上皮基因功能。 

【文章来源】：东北农业大学学报. 2020,51(06)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

rAAV2载体构建及病毒包装

rAAV2侵染小鼠子宫内膜上皮原代细胞，48 h后荧光显微镜观察细胞侵染率达100%（见图2A、B），结果表明2型腺相关病毒可有效侵染小鼠子宫内膜上皮细胞；Real-time PCR检测各组rAAV2沉默Plekhs1基因表达效果，每组cDNA样品3组平行样，其中rAAV2-PL3沉默效果显著（见图2C），制备高浓度rAAV2-PL3用于在体注射试验。2.3探究rAAV2-PL3注射小鼠子宫表达规律

小鼠子宫角注射rAAV2-PL3 2周后，与正常雄鼠交配，隔天早上检查阴道栓，见栓21 d后统计小鼠出生情况。由表2可知，注射rAAV2-PL3试验组小鼠产仔数分别为3、6、6、7、5只；注射rAAV2-SCR对照组小鼠产仔数分别为12、11、12、10、11只；可见试验组比对照组产仔数减少，说明干扰Plekhs1对生殖有较大影响。F1代小鼠生育情况统计学分析，注射rAAV2-PL3小鼠产仔数明显减少（P<0.05）（见图5）。图4 rAAV2-PL3沉默子宫上皮Plekhs1表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠心肌层注射方法的改进[J]. 王惠,赵蓉,周学中.  上海大学学报(自然科学版). 2017(06)
[2]猪圆环病毒2型Cap蛋白在杆状病毒系统表达及鉴定[J]. 宋月,姜艳萍,崔文,李一经.  东北农业大学学报. 2012(03)
[3]小鼠输卵管、子宫和卵巢中EGF-R mRNA表达的研究[J]. 张黎霞,严云勤,曹允考,谭景和.  东北农业大学学报. 2000(02)

硕士论文
[1]Plekhs1在小鼠子宫接受态转变过程中的表达与调节[D]. 马珍子.东北农业大学 2015



本文编号：3477094