大白菜抗根肿病基因CRq的精细定位及克隆
发布时间：2021-11-05 18:47
大白菜根肿病是由根肿菌属根肿菌侵染十字花科植株的根部引起的,该病有着十字花科作物的“癌症”之称。因此,挖掘抗病基因,培育抗病品种,对大白菜根肿病研究具有十分重要的意义。本研究在实验室以大白菜抗病DH系Y635-10和感病DH系Y177-47作为研究亲本,构建F2分离群体,利用BSA-Seq和RNA-Seq对根肿病抗病基因CRq进行精细定位的基础上,对CRq进行了克隆,利用Gateway技术构建了植物过表达载体,对拟南芥进行遗传转化,并对转基因植株进行了抗病性鉴定,主要得到以下结果:1.在河南省农科院园艺所新野县根肿病实验基地对构建的F2分离群体进行春、秋两季的抗病性鉴定试验结果发现F2分离群体的抗病、感病植株的分离比例约为3:1,根据孟德尔遗传定律对抗性鉴定结果进行分析,判断大白菜根肿病抗性为一个主效基因控制。2.在F2分离群体表型鉴定的基础上,依据抗病、感病的表型的差异,选取极端抗、感表型的个体及亲本,构建2个测序深度为10x的亲本DNA池和2个测序深度为50x的F2分离群体极端抗、感DNA池,进行BSA-Seq分析,将抗性基因初步定位于A03染色体的24.30-24.75区域(45...
【文章来源】： 郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【文章目录】：
摘要
Abstract
1. 文章综述
1.1 大白菜根肿病概述
1.1.1 根肿病的起源及危害
1.1.2 根肿菌的分类及生活史
1.1.3 根肿菌生理小种的鉴别
1.1.4 根肿病的防治方法
1.2 大白菜抗根肿病基因与分子标记的研究进展
1.2.1 大白菜抗根肿病基因的研究现状
1.2.2 分子标记类型及应用
1.3 BSA-Seq和RNA-Seq的研究及应用
1.3.1 BSA-Seq的原理及研究进展
1.3.2 RNA-Seq的研究及应用
1.4 研究的目的及意义
2. 大白菜抗根肿病候选基因CRq的精细定位
2.1 材料与方法
2.1.1 材料和群体构建
2.1.2 抗病性鉴定及病情分级
2.1.3 基因组DNA提取及抗感池构建
2.1.4 BSA测序分析流程
2.2 结果与分析
2.2.1 F2分离群体抗根肿病鉴定
2.2.2 BSA测序及数据质控
2.2.3 比对及注释分析
2.2.4 亲本未比对上数据组装分析
2.2.5 SNP-index分析及候选基因潜在区域确定
2.2.6 抗根肿病基因CRq的精细定位
2.3 讨论
2.4 小结
3. 大白菜抗根肿病候选基因CRq的克隆
3.1 材料与方法
3.1.1 植物材料
3.1.2 质粒及菌种
3.1.3 试剂及仪器
3.1.4 培养基及抗生素溶液的配制
3.1.5 植物组织总RNA和DNA的提取及检测
3.1.6 单链c DNA的合成
3.1.7 CRq基因克隆及测序
3.2 结果与分析
3.2.1 大白菜组织RNA和DNA的提取及检测
3.2.2 CRq基因克隆
3.2.3 抗根肿病基因CRq序列分析
3.3 讨论
3.4 小结
4. 大白菜抗根肿病候选基因CRq的植物过表达载体构建及拟南芥遗传转化
4.1 材料与方法
4.1.1 植物材料
4.1.2 总RNA的提取及RT-PCR
4.1.3 候选基因CRq的克隆及植物过表达载体构建
4.1.4 候选基因CRq的遗传转化拟南芥
4.1.5 转CRq基因拟南芥的获得及抗病性鉴定
4.2 结果与分析
4.2.1 CRq基因植物过表达载体构建
4.2.2 转基因拟南芥的获得
4.2.3 转基因拟南芥的抗病性鉴定
4.3 讨论
4.4 小结
5. 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
个人简历
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]十字花科植物抗根肿病研究进展 [J]. 张凡,李林梅,崔海芳,尹俊龙,郭英琪,岳艳玲. 湖南生态科学学报. 2017(03)
[2]利用超级集群分离分析法鉴别大豆增变基因 [J]. 常玮,王娟,黄志刚,陈吉宝. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(12)
[3]Genome-wide Investigation of micro RNAs and Their Targets in Brassica rapa ssp. pekinensis Root with Plasmodiophora brassicae Infection [J]. WEI Xiaochun,XU Wen,YUAN Yuxiang,YAO Qiuju,ZHAO Yanyan,WANG Zhiyong,JIANG Wusheng,ZHANG Xiaowei. Horticultural Plant Journal. 2016(04)
[4]利用BSA法发掘玉米抗灰斑病主效QTL [J]. 吕香玲,郑克志,李元,宋茂兴,闫伟,张旷野,李凤海,史振声. 玉米科学. 2015(05)
[5]8种药剂防治大白菜根肿病田间药效试验比较 [J]. 宋小慧,赵利民,陈红红,程永安,张恩慧,李高宝,许忠民. 长江蔬菜. 2014(16)
[6]利用BSA法检测水稻条纹叶枯病高效应抗性位点 [J]. 张云辉,张所兵,林静,汪迎节,方先文. 华北农学报. 2014(02)
[7]低Ca对拟南芥幼苗生长及盐胁迫影响初探 [J]. 王静,陈建华,伊力奇,冯利霞,祁智,亢燕. 华北农学报. 2014(02)
[8]莲藕耐盐基因CDPK的cDNA克隆及序列分析 [J]. 臧姝,尹静静,程立宝,李良俊,常爱玲,史旻. 生物技术. 2013(06)
[9]李宝聚博士诊病手记(六十四) 大白菜根肿病简易药剂防治技术 [J]. 朱发娣,谢学文,李宝聚. 中国蔬菜. 2013(19)
[10]病原微生物药敏检测方法的研究进展 [J]. 刁菁,杨秀生,李天保,叶海斌,许拉,樊英,王淑娴. 中国农学通报. 2013(08)
博士论文
[1]大白菜抗根肿病基因CRb的分离克隆与功能鉴定[D]. 张腾.沈阳农业大学 2015
[2]黄瓜果实苦味基因遗传分析及精细定位[D]. 张圣平.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]新型春性甘蓝型油菜开花相关基因的筛选及表达模式研究[D]. 张生萍.青海大学 2017
[2]大豆作为陷阱植物防治根肿病的效果评价及机制研究[D]. 唐林.华中农业大学 2016
[3]水稻灌浆期耐热相关基因OsHP29和OsHP40的克隆及其功能分析[D]. 彭琦.江西农业大学 2016
[4]辣椒根腐疫病抗性基因的精细定位的研究[D]. 巢娟.湖南农业大学 2015
[5]大白菜根肿病抗性基因分子标记与定位[D]. 薛银鸽.郑州大学 2014
[6]草酸氧化酶基因（OxO）遗传转化拟南芥及其抗病机理的初步分析[D]. 胡杰.郑州大学 2014
[7]十字花科作物品种抗根肿病鉴定、抗性生化指标及化防药剂筛选[D]. 黄小莉.湖南农业大学 2013
[8]大白菜根肿病抗性基因的分子标记及定位[D]. 王彤彤.中国农业科学院 2012
[9]大白菜根肿病病原菌检测与防治技术研究[D]. 李妍.东北农业大学 2010
本文编号：3478321
【文章来源】： 郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【文章目录】：
摘要
Abstract
1. 文章综述
1.1 大白菜根肿病概述
1.1.1 根肿病的起源及危害
1.1.2 根肿菌的分类及生活史
1.1.3 根肿菌生理小种的鉴别
1.1.4 根肿病的防治方法
1.2 大白菜抗根肿病基因与分子标记的研究进展
1.2.1 大白菜抗根肿病基因的研究现状
1.2.2 分子标记类型及应用
1.3 BSA-Seq和RNA-Seq的研究及应用
1.3.1 BSA-Seq的原理及研究进展
1.3.2 RNA-Seq的研究及应用
1.4 研究的目的及意义
2. 大白菜抗根肿病候选基因CRq的精细定位
2.1 材料与方法
2.1.1 材料和群体构建
2.1.2 抗病性鉴定及病情分级
2.1.3 基因组DNA提取及抗感池构建
2.1.4 BSA测序分析流程
2.2 结果与分析
2.2.1 F2分离群体抗根肿病鉴定
2.2.2 BSA测序及数据质控
2.2.3 比对及注释分析
2.2.4 亲本未比对上数据组装分析
2.2.5 SNP-index分析及候选基因潜在区域确定
2.2.6 抗根肿病基因CRq的精细定位
2.3 讨论
2.4 小结
3. 大白菜抗根肿病候选基因CRq的克隆
3.1 材料与方法
3.1.1 植物材料
3.1.2 质粒及菌种
3.1.3 试剂及仪器
3.1.4 培养基及抗生素溶液的配制
3.1.5 植物组织总RNA和DNA的提取及检测
3.1.6 单链c DNA的合成
3.1.7 CRq基因克隆及测序
3.2 结果与分析
3.2.1 大白菜组织RNA和DNA的提取及检测
3.2.2 CRq基因克隆
3.2.3 抗根肿病基因CRq序列分析
3.3 讨论
3.4 小结
4. 大白菜抗根肿病候选基因CRq的植物过表达载体构建及拟南芥遗传转化
4.1 材料与方法
4.1.1 植物材料
4.1.2 总RNA的提取及RT-PCR
4.1.3 候选基因CRq的克隆及植物过表达载体构建
4.1.4 候选基因CRq的遗传转化拟南芥
4.1.5 转CRq基因拟南芥的获得及抗病性鉴定
4.2 结果与分析
4.2.1 CRq基因植物过表达载体构建
4.2.2 转基因拟南芥的获得
4.2.3 转基因拟南芥的抗病性鉴定
4.3 讨论
4.4 小结
5. 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
个人简历
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]十字花科植物抗根肿病研究进展 [J]. 张凡,李林梅,崔海芳,尹俊龙,郭英琪,岳艳玲. 湖南生态科学学报. 2017(03)
[2]利用超级集群分离分析法鉴别大豆增变基因 [J]. 常玮,王娟,黄志刚,陈吉宝. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(12)
[3]Genome-wide Investigation of micro RNAs and Their Targets in Brassica rapa ssp. pekinensis Root with Plasmodiophora brassicae Infection [J]. WEI Xiaochun,XU Wen,YUAN Yuxiang,YAO Qiuju,ZHAO Yanyan,WANG Zhiyong,JIANG Wusheng,ZHANG Xiaowei. Horticultural Plant Journal. 2016(04)
[4]利用BSA法发掘玉米抗灰斑病主效QTL [J]. 吕香玲,郑克志,李元,宋茂兴,闫伟,张旷野,李凤海,史振声. 玉米科学. 2015(05)
[5]8种药剂防治大白菜根肿病田间药效试验比较 [J]. 宋小慧,赵利民,陈红红,程永安,张恩慧,李高宝,许忠民. 长江蔬菜. 2014(16)
[6]利用BSA法检测水稻条纹叶枯病高效应抗性位点 [J]. 张云辉,张所兵,林静,汪迎节,方先文. 华北农学报. 2014(02)
[7]低Ca对拟南芥幼苗生长及盐胁迫影响初探 [J]. 王静,陈建华,伊力奇,冯利霞,祁智,亢燕. 华北农学报. 2014(02)
[8]莲藕耐盐基因CDPK的cDNA克隆及序列分析 [J]. 臧姝,尹静静,程立宝,李良俊,常爱玲,史旻. 生物技术. 2013(06)
[9]李宝聚博士诊病手记(六十四) 大白菜根肿病简易药剂防治技术 [J]. 朱发娣,谢学文,李宝聚. 中国蔬菜. 2013(19)
[10]病原微生物药敏检测方法的研究进展 [J]. 刁菁,杨秀生,李天保,叶海斌,许拉,樊英,王淑娴. 中国农学通报. 2013(08)
博士论文
[1]大白菜抗根肿病基因CRb的分离克隆与功能鉴定[D]. 张腾.沈阳农业大学 2015
[2]黄瓜果实苦味基因遗传分析及精细定位[D]. 张圣平.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]新型春性甘蓝型油菜开花相关基因的筛选及表达模式研究[D]. 张生萍.青海大学 2017
[2]大豆作为陷阱植物防治根肿病的效果评价及机制研究[D]. 唐林.华中农业大学 2016
[3]水稻灌浆期耐热相关基因OsHP29和OsHP40的克隆及其功能分析[D]. 彭琦.江西农业大学 2016
[4]辣椒根腐疫病抗性基因的精细定位的研究[D]. 巢娟.湖南农业大学 2015
[5]大白菜根肿病抗性基因分子标记与定位[D]. 薛银鸽.郑州大学 2014
[6]草酸氧化酶基因（OxO）遗传转化拟南芥及其抗病机理的初步分析[D]. 胡杰.郑州大学 2014
[7]十字花科作物品种抗根肿病鉴定、抗性生化指标及化防药剂筛选[D]. 黄小莉.湖南农业大学 2013
[8]大白菜根肿病抗性基因的分子标记及定位[D]. 王彤彤.中国农业科学院 2012
[9]大白菜根肿病病原菌检测与防治技术研究[D]. 李妍.东北农业大学 2010
本文编号：3478321
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