人肠道病毒D68型5′UTR间隔区域对下游基因表达的影响

发布时间：2021-11-16 15:27

　　【背景】人肠道病毒D68型（EV-D68）属于小RNA病毒科肠道病毒属人肠道病毒D组,在2014年8月至2015年1月间,该病毒引起的感染在北美显著增多,我国也出现流行。相对于原始的Fermon毒株,流行株5′UTR区域几乎都存在一两处缺失,在起始密码子ATG前还存在两处ataaca重复序列,这两处位点的功能尚未见报道。【目的】探讨流行株5′UTR区域的缺失对下游基因表达的影响,以及ataaca重复序列的功能。【方法】通过序列比对分析现阶段流行株与原始毒株Fermon株5′UTR的差异以及保守区域,利用分子生物学方法缺失上述区域后,利用双荧光素酶报告系统分析5′UTR中上述区域对下游报告基因的影响。【结果】序列比对分析发现,目前流行的EV-D68毒株在对应于Fermon株基因组5′UTR的685-707区域发生了23个碱基的缺失,而部分毒株还在718-729区域发生了第二处缺失。荧光素酶结果显示,仅第一处缺失可以极大地提高下游基因的表达量,同时具有两处缺失则与野生型几乎相当,而仅缺失第二段序列则降低了下游基因的表达量。此外,还发现第一处缺失中的序列可能对下游基因表达起到了抑制作用,而靠... 

【文章来源】：微生物学通报. 2020,47(12)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

EV-D68病毒5′UTR间隔区的序列比对

用于检测EV-D68病毒5′UTR活性的双荧光素酶报告载体的示意图(A)和重组质粒的PCR鉴定(B)

如图3所示，相对于具有野生型5′UTR的质粒(p5Ferm)，含有5′UTR第一段缺失序列的质粒(p Del1)具有最高的荧光素酶相对表达量(2.053±0.115)；仅含有5′UTR第二段缺失序列的质粒(p Del2)具有最低的荧光素酶相对表达量(0.424±0.012)；两段序列同时缺失的质粒(p Del Both)与野生型质粒(p5Ferm)荧光素酶表达量居中，分别为0.999±0.048、0.963±0.078。上述结果表明，相对于野生型5′UTR，缺失第一段的5′UTR序列介导了下游报告基因最为高效的表达(P<0.05)，而仅缺失第二段的5′UTR则具有最低的下游报告基因表达量(P<0.05)；两段同时缺失的5′UTR与野生型表达量没有统计学差异(P>0.05)。2.4 间隔区域ataaca序列缺失对下游基因表达的影响


本文编号：3499151