家蚕类ω3-/Δ6-脂肪酸脱氢酶基因克
发布时间：2021-11-16 16:58
家蚕是重要的经济昆虫之一,也是非常重要的模式昆虫和实验材料,蚕蛹是重要的蚕桑产业副产物,对蚕蛹脂肪酸组成及其合成机制的研究可以为蚕蛹的综合利用提供理论依据,对家蚕脂肪酸合成代谢的分子机制研究显得十分必要。本论文基于家蚕最新基因组数据库资源,通过生物信息分析方法对家蚕脂肪脱氢酶进行克隆、序列分析,并对家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因进行了表达模式、原核表达、酿酒酵母表达等研究,为探究BmFAD3-like和BmD6DES基因的功能,对低温诱导、真菌侵染和RNAi的处理后的蚕蛹体内两个基因的mRNA相对转录水平变化进行了初步研究。获得如下研究结果:1.家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因的克隆及序列分析利用脂肪酸脱氢酶蛋白保守的组氨酸结构域序列对家蚕基因组序列进行同源性检索,设计合成特异性引物,从蚕蛹中分别克隆到1 083 bp和1 335 bp的cDNA片段,分别命名为BmFAD3-like和BmD6DES。利用cDNA末端快速快速扩增技术（RACE）对两个脂肪酸脱氢酶基因进行了cDNA全长扩增,BmFAD3-like全长为1 727 bp,开放阅读框（ORF）全...
【文章来源】：江苏科技大学江苏省
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
阳性转化菌的菌液PCR鉴定泳道：M，L2000marker1-8，pYBmFAD3-like阳性转化菌菌液PCR结果，12-17，pYBmD6DES
PCR product of the pYBmD6DES positive recombinantA B图4.5 重组质粒pYBmFAD3-like 和pYBmD6DES 的双酶切鉴定图A 泳道1 ，pYBmFAD3-like 质粒，2 ，pYBmFAD3-like 质粒经Hind III 、XbaI 双酶切3，BmFAD3-like PCR 产物 M，DL10 000 DNA marker 图 B 泳道：1，pYBmD6DES 质粒 2，pYD6DES
检测BmFAD3-like 和 BmD6DES 基因的功能，分别用 和 pYBmD6DES 转化酿酒酵母细胞，获得转基和 YBmD6DES，经半乳糖诱导时分别加入亚油酸(LA培养产物的总脂肪酸。脂肪酸经三氟化硼-甲醇甲酯准品（Sigma 18918-1AMP）作为标准，以空载体 pY物作为对照进行 GC 分析。结果酵母工程菌株 YBm生了与混合脂肪酸甲酯中标准品 α-亚麻酸甲酯标准品体的对照样中没有出现相应的峰(图 4.7B、4.7C)。A.8%，底物亚油酸转化为产物 α-亚麻酸（ALA）的转化率母工程菌株 YBmD6DES 气相色谱检测图谱上产生了准品 γ-亚麻酸甲酯的保留时间相同的峰，而在空载体 4.6B、4.6C)。γ-亚麻酸 GLA 含量占细胞总脂肪酸含化为产物 α-亚麻酸（ALA）的转化率为 6.5％(表 4.
【参考文献】：
期刊论文
[1]棉花幼苗对低温胁迫的响应及抗冷机制初步研究[J]. 王俊娟,王帅,陆许可,阴祖军,王德龙,樊伟莉,穆敏,郭丽雪,叶武威,喻树迅. 棉花学报. 2017(02)
[2]滇牡丹ω-3脂肪酸脱氢酶基因克隆与功能分析[J]. 朱金鑫,孙金金,原晓龙,王娟,杨宇明,王毅. 中国油脂. 2017(02)
[3]胡麻脂肪酸脱氢酶基因fad3b过表达小鼠模型的建立及其功能分析[J]. 魏著英,菅璐,杨磊,高阳,王东,陈晨,左永春,李光鹏. 中国细胞生物学学报. 2017(02)
[4]深黄被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究[J]. 王长远,全越,沈冰蕾,姚笛,于长青. 农产品加工. 2016(14)
[5]千里光脂肪酸脱氢酶（D6D）的保守基序（CSM）与功能结构域分析[J]. 王蕾,罗才林,徐德林,钱刚. 江苏农业科学. 2016(06)
[6]镜鲤△6脂肪酸脱氢酶CDNA的克隆与表达[J]. 吴景,郑先虎,匡友谊,吕伟华,曹顶臣,冬方,何立川,孙效文. 水产学杂志. 2015(01)
[7]花生ω-3△15-脂肪酸脱氧酶基因AhFAD3A的克隆及其表达[J]. 吴列洪,李付振,吴学龙,宋度林,王美兴. 中国油料作物学报. 2015(01)
[8]低温和外源不饱和脂肪酸对高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因表达的影响[J]. 于爱群,石桐磊,张飙,邢来君,李明春. 微生物学报. 2012(11)
[9]家蚕和野桑蚕脂肪酸脱氢酶desat4全长cDNA和启动子的克隆及其原核表达[J]. 陈全梅,程道军,马振刚,胡晓明,查幸福,赵萍. 昆虫学报. 2012(08)
[10]低温对2种紫草科植物△6-脂肪酸脱氢酶基因表达的影响[J]. 张芳转,周晶,陈光辉,李冠. 西北农业学报. 2011(08)
博士论文
[1]家蚕新突变体二龄不眠蚕基因的定位克隆及功能研究[D]. 吴凡.江苏科技大学 2016
[2]花生四烯酸和二十碳五烯酸合成途径的构建及大豆种子特异性启动子的改造[D]. 黎明.南开大学 2012
[3]月见草△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆与异源表达[D]. 黄胜和.内蒙古大学 2009
[4]中间锦鸡儿油酸脱氢酶（FAD2）基因克隆及酵母表达调控的研究[D]. 林萍.中国林业科学研究院 2008
[5]ω-3脂肪酸去饱和酶基因的克隆、鉴定及转基因小鼠的制备[D]. 朱贵明.西北农林科技大学 2006
硕士论文
[1]南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L脂肪酸脱氢酶基因及其细胞膜流动性调控分子机制研究[D]. 綦晓青.国家海洋局第一海洋研究所 2016
[2]文冠果脂肪酸合成两个关键酶基因FAE1、FAD2的克隆与表达分析[D]. 乌兰巴特尔.内蒙古大学 2015
[3]深黄被孢霉诱变菌株Δ5脂肪酸脱氢酶基因在酵母中的表达[D]. 杨溪.黑龙江八一农垦大学 2015
[4]EPA合成相关酶基因对棉花的遗传转化[D]. 桂丽娟.山东农业大学 2013
[5]家蚕3-dehydroecdysone 3β-reductase基因在家蚕免疫体系中的功能分析[D]. 周良宵.西南大学 2013
[6]紫苏ALA积累模式及ω-3脂肪酸脱氢酶基因的克隆与原核表达[D]. 邹燕.重庆师范大学 2012
[7]落叶松毛虫蛹油的提取、分析及其抗氧化稳定性的研究[D]. 胡礼禹.东北林业大学 2012
[8]橘林油脂酵母△9-和△15-脂肪酸去饱和酶基因的克隆及功能验证[D]. 张燕.华中农业大学 2011
[9]家蚕羧酸酯酶基因的克隆、序列分析及原核表达[D]. 杨微.重庆大学 2011
[10]鲈鱼BHMT基因的cDNA克隆和组织表达[D]. 宋娟娟.宁波大学 2011
本文编号：3499226
【文章来源】：江苏科技大学江苏省
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
阳性转化菌的菌液PCR鉴定泳道：M，L2000marker1-8，pYBmFAD3-like阳性转化菌菌液PCR结果，12-17，pYBmD6DES
PCR product of the pYBmD6DES positive recombinantA B图4.5 重组质粒pYBmFAD3-like 和pYBmD6DES 的双酶切鉴定图A 泳道1 ，pYBmFAD3-like 质粒，2 ，pYBmFAD3-like 质粒经Hind III 、XbaI 双酶切3，BmFAD3-like PCR 产物 M，DL10 000 DNA marker 图 B 泳道：1，pYBmD6DES 质粒 2，pYD6DES
检测BmFAD3-like 和 BmD6DES 基因的功能，分别用 和 pYBmD6DES 转化酿酒酵母细胞，获得转基和 YBmD6DES，经半乳糖诱导时分别加入亚油酸(LA培养产物的总脂肪酸。脂肪酸经三氟化硼-甲醇甲酯准品（Sigma 18918-1AMP）作为标准，以空载体 pY物作为对照进行 GC 分析。结果酵母工程菌株 YBm生了与混合脂肪酸甲酯中标准品 α-亚麻酸甲酯标准品体的对照样中没有出现相应的峰(图 4.7B、4.7C)。A.8%，底物亚油酸转化为产物 α-亚麻酸（ALA）的转化率母工程菌株 YBmD6DES 气相色谱检测图谱上产生了准品 γ-亚麻酸甲酯的保留时间相同的峰，而在空载体 4.6B、4.6C)。γ-亚麻酸 GLA 含量占细胞总脂肪酸含化为产物 α-亚麻酸（ALA）的转化率为 6.5％(表 4.
【参考文献】：
期刊论文
[1]棉花幼苗对低温胁迫的响应及抗冷机制初步研究[J]. 王俊娟,王帅,陆许可,阴祖军,王德龙,樊伟莉,穆敏,郭丽雪,叶武威,喻树迅. 棉花学报. 2017(02)
[2]滇牡丹ω-3脂肪酸脱氢酶基因克隆与功能分析[J]. 朱金鑫,孙金金,原晓龙,王娟,杨宇明,王毅. 中国油脂. 2017(02)
[3]胡麻脂肪酸脱氢酶基因fad3b过表达小鼠模型的建立及其功能分析[J]. 魏著英,菅璐,杨磊,高阳,王东,陈晨,左永春,李光鹏. 中国细胞生物学学报. 2017(02)
[4]深黄被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究[J]. 王长远,全越,沈冰蕾,姚笛,于长青. 农产品加工. 2016(14)
[5]千里光脂肪酸脱氢酶（D6D）的保守基序（CSM）与功能结构域分析[J]. 王蕾,罗才林,徐德林,钱刚. 江苏农业科学. 2016(06)
[6]镜鲤△6脂肪酸脱氢酶CDNA的克隆与表达[J]. 吴景,郑先虎,匡友谊,吕伟华,曹顶臣,冬方,何立川,孙效文. 水产学杂志. 2015(01)
[7]花生ω-3△15-脂肪酸脱氧酶基因AhFAD3A的克隆及其表达[J]. 吴列洪,李付振,吴学龙,宋度林,王美兴. 中国油料作物学报. 2015(01)
[8]低温和外源不饱和脂肪酸对高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因表达的影响[J]. 于爱群,石桐磊,张飙,邢来君,李明春. 微生物学报. 2012(11)
[9]家蚕和野桑蚕脂肪酸脱氢酶desat4全长cDNA和启动子的克隆及其原核表达[J]. 陈全梅,程道军,马振刚,胡晓明,查幸福,赵萍. 昆虫学报. 2012(08)
[10]低温对2种紫草科植物△6-脂肪酸脱氢酶基因表达的影响[J]. 张芳转,周晶,陈光辉,李冠. 西北农业学报. 2011(08)
博士论文
[1]家蚕新突变体二龄不眠蚕基因的定位克隆及功能研究[D]. 吴凡.江苏科技大学 2016
[2]花生四烯酸和二十碳五烯酸合成途径的构建及大豆种子特异性启动子的改造[D]. 黎明.南开大学 2012
[3]月见草△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆与异源表达[D]. 黄胜和.内蒙古大学 2009
[4]中间锦鸡儿油酸脱氢酶（FAD2）基因克隆及酵母表达调控的研究[D]. 林萍.中国林业科学研究院 2008
[5]ω-3脂肪酸去饱和酶基因的克隆、鉴定及转基因小鼠的制备[D]. 朱贵明.西北农林科技大学 2006
硕士论文
[1]南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L脂肪酸脱氢酶基因及其细胞膜流动性调控分子机制研究[D]. 綦晓青.国家海洋局第一海洋研究所 2016
[2]文冠果脂肪酸合成两个关键酶基因FAE1、FAD2的克隆与表达分析[D]. 乌兰巴特尔.内蒙古大学 2015
[3]深黄被孢霉诱变菌株Δ5脂肪酸脱氢酶基因在酵母中的表达[D]. 杨溪.黑龙江八一农垦大学 2015
[4]EPA合成相关酶基因对棉花的遗传转化[D]. 桂丽娟.山东农业大学 2013
[5]家蚕3-dehydroecdysone 3β-reductase基因在家蚕免疫体系中的功能分析[D]. 周良宵.西南大学 2013
[6]紫苏ALA积累模式及ω-3脂肪酸脱氢酶基因的克隆与原核表达[D]. 邹燕.重庆师范大学 2012
[7]落叶松毛虫蛹油的提取、分析及其抗氧化稳定性的研究[D]. 胡礼禹.东北林业大学 2012
[8]橘林油脂酵母△9-和△15-脂肪酸去饱和酶基因的克隆及功能验证[D]. 张燕.华中农业大学 2011
[9]家蚕羧酸酯酶基因的克隆、序列分析及原核表达[D]. 杨微.重庆大学 2011
[10]鲈鱼BHMT基因的cDNA克隆和组织表达[D]. 宋娟娟.宁波大学 2011
本文编号：3499226
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