共转orca3/g10h双基因长春花毛状根生物碱量及转录差异研究

发布时间：2021-11-17 00:00

　　目的共转orca3/g10h双基因于长春花毛状根,提高抗癌生物碱量。方法通过构建p CAMBIA1304++orca3+g10h表达载体,利用发根农杆菌介导获得双转orca3/g10h基因长春花毛状根。利用RT-q PCR研究共转orca3/g10h基因长春花毛状根萜类吲哚生物碱（TIAs）生物合成途径中相关基因的转录差异。采用HPLC研究共转orca3/g10h基因长春花毛状根TIAs（包括长春碱、长春新碱和阿吗碱）量。结果转基因长春花毛状根中与TIAs生物合成相关基因asα、ggpps、g10h、str、tdc、cpr、sgd和dat转录水平均较非转基因长春花普通根高。HPLC结果表明,转基因长春花毛状根总TIAs量达到58.23 mg/g,是非转基因长春花普通根的27.5倍。长春碱和长春新碱的平均质量分数均较非转基因普通根高。其中,长春碱平均质量分数最高,为51.30 mg/g,是非转基因普通根的197.3倍。结论共转orca3/g10h基因能够有效提高长春花毛状根中TIAs量。 

【文章来源】：中草药. 2016,47(18)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 植物表达载体p CAMBIA1304+-orca3-g10h表达载体的构建
        1.2.2 发根农杆菌C58C1介导p CAMBIA1304++orca3+g10h转化长春花及阳性克隆检测
        1.2.3 转基因长春花毛状根TIAs生物合成相关基因转录差异
        1.2.4 长春花毛状根TIAs提取
        1.2.5 转基因长春花毛状根TIAs量的测定
2 结果与分析
    2.1 植物表达载体p CAMBIA1304+-orca3-g10h的构建
    2.2 发根农杆菌介导p CAMBIA1304++orca3+g10h转化长春花PCR检测
    2.3 共转orca3/g10h长春花毛状根TIAs生物合成相关基因转录差异
    2.4 HPLC检测共转orca3/g10h基因长春花毛状根TIAs量
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3499819