当前位置:主页 > 科技论文 > 基因论文 >

luxS基因对多粘类芽孢杆菌HY96-2生物膜形成及防治青枯病的影响

发布时间:2021-11-25 04:38
  以Poenibacillus polymyxa HY96-2为生物防治剂创制的微生物农药可以在田间有效防治番茄青枯病,但该菌防治青枯病的机制亟待进一步深入研究。良好的定殖能力是生防菌发挥防治作用的首要因素,形成生物膜是生防菌具有良好定殖能力的重要指征。另外,群体感应可以调控生物膜形成。本文旨在研究AI-2群体感应关键调控基因huxS对P.polymyxa HY96-2生物膜形成及其防治番茄青枯病能力的影响。本文构建了P.polymyxa HY96-2的luxS基因缺失株、回补株以及过表达株。通过构建LuxS蛋白的进化树结果显示P.polymyxa HY96-2 LuxS蛋白和其它益生菌的LuxS蛋白的同源性较高,并验证了P.polymyxa HY96-2 LuxS蛋白可以诱导AI-2合成的活性。在离体和活体条件下评估了突变株及野生株形成生物膜的能力,结果表明,在离体及活体模型中luxS均正调控P.polymyxa HY96-2生物膜的形成。防治番茄青枯病的盆栽实验结果表明,在发病前期、高峰期和后期,luxS缺失株的防效都最低(发病后期,防效只有50.70±1.39%),luxS过表达株... 

【文章来源】:华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:85 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

luxS基因对多粘类芽孢杆菌HY96-2生物膜形成及防治青枯病的影响


图2.3?PCR验证质粒pRN5101-Cm的构建??Fig.?2.3?PCR?verification?of?the?construction?of?pRN5101-Cw??

生长曲线,霉素,抗性,片段


华东理工大学硕士学位论文?第23页??3.按照测定值绘制生长曲线。??2.4结果与讨论??2.4.1?/?〇/>7?>知?HY96-2-A/WX51?的构建结果??(1)从户/^/_>洲;^〇^1丫96-2?丁基因组上克隆/狀5-叩(八)、/狀5-£1〇\¥11((:),从质??粒PDG1661上克隆的氯霉素抗性盒(B),通过DNA纯化回收试剂盒对PCR产物进行??纯化回收,然后用1%琼脂糖凝胶电泳检测出的条带如图2.2所示。??S?SImwA??I??图2.2克隆的/itvS-up?(A)、氣霉素抗性盒(B)、/"jeS-down?(C)片段??Fig.?2.2?Cloned?fragments?of?luxS-up?(A),?chloramphenicol?resistance?gene?(B),?/wxS-down?(C)??(2)将纯化后的?A:?/wxS-up?(842bp)、B:氯霉素抗性盒(1188bp)、C:?/wxS-down??(935bp)与经过?5?顯?HI?和///>?dm?双酶切的质粒?pRN5101?按照?HieffClone??Multi?One??StepCloningKit进行重组反应,热激转入DH5a中,PCR验证得到1个阳性转化子,验??证结果如图2.3所示,送样测序结果正确如图2.4所示。??M?1?2?345678??soooi^p?f?:i',!?^?.,'??_、()(丨j)l)p?:?.?,??^OOOI^P??10(X)bP?■??、"i)p?鮮y?種:, ̄外_-麵_=..1?”??>o〇bp?*.嚷.讓.■謂^?*;?1??250bp

序列,质粒,测序,氯霉素


580?2590?2600?2610?2620?2630?2640?2650?2660?2670?2680??ABC序列.seq?W糾决只祝职:VW本猫扣:V从l-.U?士?热符fcW咖1W抖从VW抑私队!土l:T保:W??Consensus?jggcgacggccactgagcctgctccgcaccaaatcccggcgaacgcggcccgcccaggcatcgcagaaacgccgatgaagcaccgtgagcggaccgaagggggcgccacccgcggaatgacc'??图2.4测序验证质粒pRN5101-O?的构建??Fig.?2.4?Sequencing?verification?of?the?construction?of?pRN5101-Cw??C3)在25吗/mL氯霉素和5?pg/mL红霉素的PB平板上挑单菌落对氯霉素抗性盒??进行PCR验证,菌落PCR的结果如图2.5所示,获得约1200?bp的条带,说明pRN5101-??Cw?己经电击转入尸?HY96-2?WT?得到?pRN5101-Cm/P.??M?1?2?3?4?5?6?7??SOOObp??5000bp?翻??300()bp?、暫争錄讀i6七續齋雜靈參擧」??:000bp??lOOObp?’?'v^^-?念、;二??75〇bP?^rjwr^f^r/y-:.次货^?丨??500bp?'?_.?/?-???1、?'广?一、???、?1??iOObp??图?2.5?PCR?验证质粒?pRN5101-Ow?转入?HY96-2??Fig.?2.5?PCR?verification?of?pRN5101-Cw?

【参考文献】:
期刊论文
[1]Fusaricidins in Paenibacillus polymyxa A21 and their antagonistic activity against Botrytis cinerea on tomato[J]. Weicheng LIU,Xiaoli WU,Xuelian BAI,Hong ZHANG,Dan DONG,Taotao ZHANG,Huiling WU.  Frontiers of Agricultural Science and Engineering. 2018(02)
[2]信号分子AI-2的检测方法研究进展[J]. 燕彩玲,李博,顾悦,贾原博,刘亚东,贺银凤.  微生物学通报. 2016(06)
[3]多粘类芽胞杆菌SC2基因敲除体系的建立[J]. 张文娣,丁延芹,姚良同,刘凯,杜秉海.  微生物学报. 2013(12)
[4]多黏类芽孢杆菌JSa-9电转化方法的优化[J]. 高玲,邓阳,陆兆新,吕凤霞,别小妹.  食品科学. 2014(11)
[5]多粘类芽孢杆菌HY96-2产脂肽类抗真菌物质的研究[J]. 范磊,张道敬,刘振华,陶黎明,罗远婵,魏鸿刚,李淑兰,李元广.  天然产物研究与开发. 2012(06)
[6]植物青枯病的生物防治研究进展[J]. 陈勇,金晨钟.  湖南农业科学. 2009(07)
[7]多粘类芽孢杆菌HY96-2对番茄青枯病的防治作用[J]. 徐玲,王伟,魏鸿刚,沈国敏,李元广.  中国生物防治. 2006(03)
[8]茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)分子生物学基础及其致病机制[J]. 李林章,谢从华,柳俊.  中国马铃薯. 2005(05)



本文编号:3517416

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3517416.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户4ff35***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com