毛果杨叶肉原生质体分离及BpFLA20基因亚细胞定位

发布时间：2021-11-26 15:37

　　以毛果杨（Populus trichocarpa）幼嫩叶片为材料,进行原生质体分离,结果表明,酶解液（20 mL）的组成为1.5%纤维素酶R10+0.4%离析酶+2 mL 0.2 mol/L MES+10 mL 0.8 mol/L甘露醇+0.2 mL 2 mol/L KCl,所得原生质体为2×10⁵个细胞/mL。在此基础上,对白桦中一个FLA（fasciclin-like arabinogalactan-protein）基因BpFLA20进行了亚细胞定位研究。系统进化分析显示,BpFLA20蛋白在序列上与次生壁合成相关的AtFLA11和AtFLA12蛋白相近。以白桦的根、茎、叶cDNA为模版,进行了荧光定量PCR实验,结果表明该基因在根中的表达量最高,在叶中的表达量最低。以本研究分离的毛果杨原生质体为受体,利用PEG介导的原生质体瞬时转化法将35S::FLA20-GFP融合表达载体转化到毛果杨原生质体中进行亚细胞定位研究,结果显示,BpFLA20蛋白定位于细胞膜。 

【文章来源】：东北林业大学学报. 2020,48(10)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

毛果杨叶片原生质体

以白桦cDNA为模板克隆目的片段,并通过1%的琼脂糖凝胶电泳检测,结果如图2所示:目的片段大小为753 bp。经测序比对,结果显示测序结果与原序列比对一致性为100%,证明BpFLA20基因克隆成功。BpFLA20基因起始于ATG,终止于TGA,共编码250个氨基酸残基。蛋白质分子质量为26.3 u。理论等电点为6.04。如图3所示BpFLA20含有一个FAS保守结构域长度为:81aa-187aa。跨膜区预测结果显示BpFLA20基因不存在跨膜区。参照对拟南芥FLA蛋白分组[33],对确认的BpFLA20基因推导的蛋白序列与21条已知的拟南芥AtFLA基因的蛋白序列进行了家族聚类分析,系统进化分析结果显示BpFLA20与AtFLA11和AtFLA12相近,且BpFLA20与AtFLA7、AtFLA9、AtFLA13、AtFLA6、AtFLA12、AtFLA11为一组。2.3 BpFLA20的组织表达

以白桦的根、茎、叶cDNA为模版,进行了荧光定量PCR试验,对白桦根、茎、叶中BpFLA20基因的表达量进行分析,结果显示:BpFLA20在叶中的表达量最低,在根中的表达量最高,是叶中表达量的5.78倍,茎中相对表达量为叶中的1.21倍。图4 BpFLA20跨膜区预测结果

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3520445