CRISPR/Cas9系统介导的小麦TaEPFL1基因编辑研究

发布时间：2021-11-27 12:33

　　TaEPFL1基因是表皮模式建成因子（EPFL）基因家族的成员,EPFL基因家族参与调节植物一系列生长发育过程。为了更好的了解TaEPFL1基因在小麦生长发育过程中的作用,我们以中国春小麦成熟种子为材料,采用CRISPR/Cas9技术特异性编辑该基因外显子区域产生靶向敲除小麦。通过研究突变基因的作用,阐明该基因的正常功能。本研究分别探讨灭菌方式、麦草畏浓度、氨基酸组分和比例、农杆菌和成熟胚共培养时间、农杆菌和愈伤组织共培养时间等对愈伤组织诱导和生长发育的影响。具体研究结果如下:1、当75%酒精浸泡时间控制在180s,30%双氧水灭菌时间15s以上时,或当30%双氧水消毒时间控制在180s,75%酒精浸泡时间15s以上时,成熟胚均未染菌。麦草畏诱导中国春成熟胚愈伤组织的最适浓度是2.5 mg·L^-1。甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸和亮氨酸是小麦成熟胚诱导的必须氨基酸。正交实验表明,中国春组培的最佳氨基酸配方为甘氨酸60.0 mg·L^-1,天冬氨酸2.0 mg·L^-1,脯氨酸2.0 mg·L^-1,亮氨酸0.1... 

【文章来源】：西华师范大学四川省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

培养14天后的愈伤组织

高分辨率熔解曲线聚类（野生型为标准）

序列对比figure8compareofsequence

【参考文献】：
期刊论文
[1]小麦表皮模式建成因子基因（TaEPFL1）的克隆、定位及表达分析[J]. 孙清栩,曲继鹏,彭正松,余燕,杨军,吴一磊,杨在君.  分子植物育种. 2018(10)
[2]Improvement of Plant Regeneration from Immature Embryos of Wheat Infected by Agrobacterium tumefaciens[J]. TAO Li-li, YIN Gui-xiang, DU Li-pu, SHI Zheng-yuan, SHE Mao-yun, XU Hui-jun and YE Xing-guo National Key Facility of Crop Gene Resources and Genetic Improvement, Key Laboratory of Crop Genetics and Breeding, Ministry of Agriculture/Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, P.R.China.  Agricultural Sciences in China. 2011(03)
[3]Dicamba and Sugar Effects on Callus Induction and Plant Regeneration from Mature Embryo Culture of Wheat[J]. REN Jiang-ping,WANG Xin-guo and YIN Jun National Engineering Research Center for Wheat/Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,P.R.China.  Agricultural Sciences in China. 2010(01)



本文编号：3522297