原发性痛风易感基因KCNQ1在小鼠单核细胞功能及致炎机制的研究

发布时间：2021-12-17 22:58

　　目的建立单核细胞特异性KCNQ1基因条件敲除小鼠模型,在此基础上构建痛风气囊模型,探讨KCNQ1参与痛风发病的具体致炎机制。方法利用条件性基因敲除技术flop^-/--loxp系统构建KCNQ1^flop/flop小鼠,与单核细胞内特异性表达cre酶的Lyz2-cre⁺工具鼠进行杂交,构建单核细胞内KCNQ1基因条件敲除小鼠（cKO小鼠）,进行繁殖及鉴定其子代小鼠基因型。western blot检测KCNQ1蛋白在单核细胞内的表达,验证目的基因KCNQ1在单核细胞表达降低或无。cKO纯合小鼠为实验组,其野生型（WT）的同窝小鼠为对照组,每组小鼠6只,均为8周龄的健康雄性小鼠,检测两组小鼠血尿酸、肝功、肾功、血糖、血脂等生化指标。构建小鼠痛风气囊模型,整体水平观察炎症反应,收集滑膜液,滑膜,血清等样本,滑膜液离心后收集沉淀,PBS重悬,炎性细胞计数以及姬姆萨染色,ELISA法检测滑膜液及血清中炎症因子IL-1β水平,HE染色观察两组小鼠滑膜病理形态学的变化,免疫组化检测滑膜中IL-1β、IL-18、MCP-1的表达。取两种基因... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

五n习户Ox/fl今LyzZ一cre+小鼠基因型鉴定结果

实验结果 实验结果1 KCNQ1 基因条件性敲除小鼠模型构建成功通过对子代小鼠基因型鉴定发现，KCNQ1flox/flox小鼠仅 583 bp 出有条带，KCNQ1flox/+小鼠在 583bp 和 480bp 出同时有条带，KCNQ1+/+仅在 480bp 出有条带，如图 1A 所示。图 1B 结果显示：Lyz2-Cre+小鼠在 700 bp 处有条带，Lyz2-Cre-小鼠在仅350 bp 处有条带。其中 157 号小鼠的基因为 KCNQ1flox/flox/Lyz2-Cre+，分离小鼠的原代单核细胞，LCM 进行体外诱导分化为单核/巨噬细胞，WesternBlot 结果显示（图 2）：KO 小鼠单核/巨噬细胞中 KCNQ1 表达明显降低，提示通过 Lyz2-Cre，单核/巨噬细胞中 KCNQ1 基因被敲除。表明单核细胞 KCNQ1 条件敲除小鼠（KCNQ1cKO）模型构建成功。

双折光的晶体状，检测 PH 值为 7.2（图4）。 2 KCNQ1 基因对炎性细胞趋化的影响尿酸盐晶体刺激 8 小时后，小鼠滑膜液中炎性细胞数量增多，但 KO+MSU 和WT+MSU 两组小鼠之间炎性细胞计数的差异不明显（6.04×106±2.58×106VS 5.56×106± 2.56×106个，P=0.698，P＞0.05，图 5） 图 4 尿酸盐晶体的偏振光显微镜下形态（×2

【参考文献】：
期刊论文
[1]基于Cre-loxP系统条件性基因敲除小鼠的构建及其应用进展[J]. 孔维健,常宇鑫,昝春芳,郑爽,杨小玉.  中国实验诊断学. 2017(12)
[2]2016中国痛风诊疗指南[J]. 曾小峰,陈耀龙.  浙江医学. 2017(21)
[3]NALP3炎性体与非感染性炎症疾病[J]. 童玉娜,何娅妮.  生理科学进展. 2011(04)
[4]KCNQ1通道的结构和功能[J]. 景红娟,何光源.  中国药理学通报. 2007(12)
[5]KCNQ1多效性研究进展[J]. 何裕嵩,夏敏,陈义汉.  中国分子心脏病学杂志. 2005(02)

博士论文
[1]原发性痛风易感基因KCNQ1基因的单核苷酸多态性对基因表达及单核细胞功能影响的研究[D]. 王静.青岛大学 2017



本文编号：3541117