过表达蒲公英鲨烯合酶基因（TaSS）对蒲公英甾醇含量影响
发布时间：2022-01-04 02:38
蒲公英甾醇具有抗乳腺炎及抑制血管炎症的作用,由于其在蒲公英中含量低,如何提高蒲公英中蒲公英甾醇含量具有重要意义。本试验以丹东蒲公英（Taraxacum antungense Kitag.）为试材,研究茉莉酸甲酯（MeJA）对丹东蒲公英总三萜含量及生物合成途径关键酶基因表达量影响。同时,克隆丹东蒲公英甾醇生物合成第一个关键酶鲨烯合酶（TaSS）基因,获得了TaSS基因过表达株系,确定TaSS基因在蒲公英甾醇生物合成中的功能。克隆TaSS基因启动子片段并分析该基因启动子顺式作用元件。本试验克隆了茉莉酸信号途径核心转录因子TaMYC2并筛选出TaMYC2基因过表达的毛状根系,初步分析TaMYC2在蒲公英甾醇生物合成途径中的功能。主要结果如下:1.分析生物合成途径关键基因在茉莉酸甲酯诱导下的表达模式,结果表明TaFPS1、TaFPS2、TaHMGR3、TaMYC2、TaMVD、TaHDR和TaSS在处理前期表达量上调,后期表达量受抑制。处理期间总三萜含量均高于对照,并且在处理3 h达到最高值,表明茉莉酸甲酯可以提高相关基因表达量来促进蒲公英总三萜化合物含量积累。2.根据丹东蒲公英转录组数据,克...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
蒲公英甾醇结构
结果与分析S 基因克隆与表达载体鉴定实验室前期测序的丹东蒲公英转录组数据，利用 Primer 5.反转录的丹东蒲公英叶片 cDNA 为模板，扩增 TaSS 目的片T 克隆载体，转化大肠杆菌，送公司测序。测序结果显示，出 1269bp 的片段，包含一个开放阅读框（ORF）大小为 1中 TaSS 基因相似度为 99%，说明成功克隆出 TaSS 基因。位点，选择 BamH I 和 Sac I 分别为上下游酶切位点，对目行酶切，纯化，连接，测序。测序结果显示，成功构建 pR。利用冻融法将 pRI101-SS 转化根癌农杆菌 GV3103。B
沈阳农业大学硕士学位论文Eleutherococcus senticosus），大豆（Glycine max），柿（Diospyros kaki）和 蒺苜蓿（Medicago truncatula）鲨烯合酶氨基酸序列的同源性 98.56%， 92.81%，.73%， 87.28%， 81.45%， 82.20%， 81.20%， 81.31%， 80.98%和 80.10%。SS 不论是核苷酸序列还是氨基酸序列都与其他植物鲨烯合酶同源性极高，说鲨烯合酶在不同植物中是非常保守的。选择 NCBI 上已经公布的鲨烯合酶序列选择 11 个植物鲨烯合酶序列构建系进化树分别是：橡胶草（AXU93510.1），雪莲（APG29293.1），青蒿（AAR20329.1），甘菊（AIX97193.1），大豆（NP_001236365.2），烟草（AWK49044.1），茶树XP_028059258.1），黄辣椒（PHU10676.1），人参（ACV88718.1），黄芪ALA23415.1），拟南芥（AAD00296.1）。发现 TaSS 与菊科植物雪莲，青蒿，甘菊同源性较高，与橡胶草属于同一分枝，结果见图 8。
【参考文献】：
期刊论文
[1]蒲公英药用研究进展[J]. 丁惠,张馨方,纪文华,黄敏,贺吉香. 辽宁中医药大学学报. 2018(09)
[2]药用植物萜类化合物活性研究进展[J]. 张建红,刘琬菁,罗红梅. 世界科学技术-中医药现代化. 2018(03)
[3]Genome analysis of Taraxacum kok-saghyz Rodin provides new insights into rubber biosynthesis[J]. Tao Lin,Xia Xu,Jue Ruan,Shizhong Liu,Shigang Wu,Xiujuan Shao,Xiaobo Wang,Lin Gan,Bi Qin,Yushuang Yang,Zhukuan Cheng,Suhua Yang,Zhonghua Zhang,Guosheng Xiong,Sanwen Huang,Hong Yu,Jiayang Li. National Science Review. 2018(01)
[4]紫杉醇临床应用及安全性研究进展[J]. 于莹,任耘. 天津药学. 2017(02)
[5]茉莉酸甲酯诱导大戟三萜类代谢的研究[J]. 张文娟,曹小迎,蒋继宏. 广西植物. 2015(04)
[6]紫外分光光度-比色法检测柿蒂中三萜类化合物的含量[J]. 蒋莺,钟晓红,陆英,程建宇,张双,何艳君. 湖南农业科学. 2013(09)
[7]基于茉莉酸甲酯诱导的丹参毛状根酚酸类成分次生代谢机制研究[J]. 李文渊,高伟,赵静,崔光红,邵爱娟,黄璐琦. 中国中药杂志. 2012(01)
[8]外源调节物质对人参毛状根生长及皂苷合成的影响[J]. 徐立新,赵寿经,梁彦龙,钱延春,金士琨. 吉林大学学报(工学版). 2010(06)
[9]植物药材次生代谢产物的积累与环境的关系[J]. 苏文华,张光飞,李秀华,欧晓昆1. 中草药. 2005(09)
[10]中药蒲公英的研究进展[J]. 凌云,郑俊华. 中国现代应用药学. 1998(03)
博士论文
[1]丹参酮合成关键基因SmCPS1与SmKSL1转录调控的研究[D]. 白朕卿.西北农林科技大学 2018
硕士论文
[1]丹东蒲公英SERK家族基因克隆和表达分析研究[D]. 王志英.沈阳农业大学 2018
[2]农杆菌介导丹东蒲公英遗传转化研究[D]. 刘越.沈阳农业大学 2018
[3]蒲公英根化学成分及其抗氧化活性研究[D]. 王一婷.延边大学 2018
[4]茉莉酸甲酯对颠茄主要生物碱含量的影响及其机理[D]. 张翠平.西南大学 2017
[5]茉莉酸甲酯对罗汉果皂苷生物合成途径的影响及罗汉果中bHLH转录因子的初筛[D]. 张凯伦.北京协和医学院 2016
[6]紫花苜蓿皂苷合成途径中重要相关基因的克隆、表达分析及遗传转化[D]. 张俏燕.中国农业科学院 2016
本文编号：3567488
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
蒲公英甾醇结构
结果与分析S 基因克隆与表达载体鉴定实验室前期测序的丹东蒲公英转录组数据，利用 Primer 5.反转录的丹东蒲公英叶片 cDNA 为模板，扩增 TaSS 目的片T 克隆载体，转化大肠杆菌，送公司测序。测序结果显示，出 1269bp 的片段，包含一个开放阅读框（ORF）大小为 1中 TaSS 基因相似度为 99%，说明成功克隆出 TaSS 基因。位点，选择 BamH I 和 Sac I 分别为上下游酶切位点，对目行酶切，纯化，连接，测序。测序结果显示，成功构建 pR。利用冻融法将 pRI101-SS 转化根癌农杆菌 GV3103。B
沈阳农业大学硕士学位论文Eleutherococcus senticosus），大豆（Glycine max），柿（Diospyros kaki）和 蒺苜蓿（Medicago truncatula）鲨烯合酶氨基酸序列的同源性 98.56%， 92.81%，.73%， 87.28%， 81.45%， 82.20%， 81.20%， 81.31%， 80.98%和 80.10%。SS 不论是核苷酸序列还是氨基酸序列都与其他植物鲨烯合酶同源性极高，说鲨烯合酶在不同植物中是非常保守的。选择 NCBI 上已经公布的鲨烯合酶序列选择 11 个植物鲨烯合酶序列构建系进化树分别是：橡胶草（AXU93510.1），雪莲（APG29293.1），青蒿（AAR20329.1），甘菊（AIX97193.1），大豆（NP_001236365.2），烟草（AWK49044.1），茶树XP_028059258.1），黄辣椒（PHU10676.1），人参（ACV88718.1），黄芪ALA23415.1），拟南芥（AAD00296.1）。发现 TaSS 与菊科植物雪莲，青蒿，甘菊同源性较高，与橡胶草属于同一分枝，结果见图 8。
【参考文献】：
期刊论文
[1]蒲公英药用研究进展[J]. 丁惠,张馨方,纪文华,黄敏,贺吉香. 辽宁中医药大学学报. 2018(09)
[2]药用植物萜类化合物活性研究进展[J]. 张建红,刘琬菁,罗红梅. 世界科学技术-中医药现代化. 2018(03)
[3]Genome analysis of Taraxacum kok-saghyz Rodin provides new insights into rubber biosynthesis[J]. Tao Lin,Xia Xu,Jue Ruan,Shizhong Liu,Shigang Wu,Xiujuan Shao,Xiaobo Wang,Lin Gan,Bi Qin,Yushuang Yang,Zhukuan Cheng,Suhua Yang,Zhonghua Zhang,Guosheng Xiong,Sanwen Huang,Hong Yu,Jiayang Li. National Science Review. 2018(01)
[4]紫杉醇临床应用及安全性研究进展[J]. 于莹,任耘. 天津药学. 2017(02)
[5]茉莉酸甲酯诱导大戟三萜类代谢的研究[J]. 张文娟,曹小迎,蒋继宏. 广西植物. 2015(04)
[6]紫外分光光度-比色法检测柿蒂中三萜类化合物的含量[J]. 蒋莺,钟晓红,陆英,程建宇,张双,何艳君. 湖南农业科学. 2013(09)
[7]基于茉莉酸甲酯诱导的丹参毛状根酚酸类成分次生代谢机制研究[J]. 李文渊,高伟,赵静,崔光红,邵爱娟,黄璐琦. 中国中药杂志. 2012(01)
[8]外源调节物质对人参毛状根生长及皂苷合成的影响[J]. 徐立新,赵寿经,梁彦龙,钱延春,金士琨. 吉林大学学报(工学版). 2010(06)
[9]植物药材次生代谢产物的积累与环境的关系[J]. 苏文华,张光飞,李秀华,欧晓昆1. 中草药. 2005(09)
[10]中药蒲公英的研究进展[J]. 凌云,郑俊华. 中国现代应用药学. 1998(03)
博士论文
[1]丹参酮合成关键基因SmCPS1与SmKSL1转录调控的研究[D]. 白朕卿.西北农林科技大学 2018
硕士论文
[1]丹东蒲公英SERK家族基因克隆和表达分析研究[D]. 王志英.沈阳农业大学 2018
[2]农杆菌介导丹东蒲公英遗传转化研究[D]. 刘越.沈阳农业大学 2018
[3]蒲公英根化学成分及其抗氧化活性研究[D]. 王一婷.延边大学 2018
[4]茉莉酸甲酯对颠茄主要生物碱含量的影响及其机理[D]. 张翠平.西南大学 2017
[5]茉莉酸甲酯对罗汉果皂苷生物合成途径的影响及罗汉果中bHLH转录因子的初筛[D]. 张凯伦.北京协和医学院 2016
[6]紫花苜蓿皂苷合成途径中重要相关基因的克隆、表达分析及遗传转化[D]. 张俏燕.中国农业科学院 2016
本文编号：3567488
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