IRX6基因的异常甲基化在胰腺癌发病中的作用研究

发布时间：2022-01-09 15:55

　　胰腺癌是一种高度恶性肿瘤,胰腺癌的治疗面临着手术根除率低、预后极差及化疗耐药的难题。深入研究胰腺癌的分子发病机制并寻找新的治疗靶点是解决胰腺癌治疗困难的前提。DNA甲基化作为真核生物DNA最常见的修饰方式,与胰腺癌的发生发展密切相关。抑癌基因启动子区域的异常甲基化导致的基因表达失活是促进肿瘤形成的重要原因。因此,寻找到能够作为胰腺癌治疗新靶点的DNA甲基化基因是改善胰腺癌治疗困难的一种新途径。在本研究中,我们通过生物信息分析的方法预测了13个在胰腺癌中异常高甲基化低表达的基因。通过对胰腺癌患者肿瘤组织和正常组织基因表达水平及甲基化水平的检测,我们鉴定出IRX6这一抑癌基因在胰腺癌中异常高甲基化,这种异常高甲基化使它的表达受到抑制。为了进一步研究IRX6在胰腺癌细胞中的生物学功能,我们通过慢病毒表达载体构建了IRX6过表达及knock-down稳转细胞株。细胞增殖实验和克隆形成实验结果显示,外源性过表达胰腺癌细胞中的IRX6,细胞的增殖能力和克隆形成能力显著降低,反之,下调的IRX6表达后细胞增殖能力和克隆形成能力显著升高。细胞毒性实验结果显示IRX6表达量的改变导致细胞对吉西他滨药物的... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 胰腺癌的治疗现状
    1.2 DNA甲基化的基本功能
    1.3 DNA甲基化与肿瘤
    1.4 DNA甲基化靶向治疗研究现状
    1.5 本文研究内容
2 胰腺癌异常高甲基化基因的筛选
    2.1 材料与方法
        2.1.1 数据来源
        2.1.2 生物信息分析路线
        2.1.3 数据处理
    2.2 结果
        2.2.1 异常高甲基化基因
        2.2.2 差异高甲基化低表达基因
        2.2.3 基因表达肿瘤差异性分析
3 IRX6在胰腺癌中异常高甲基化低表达
    3.1 实验材料
        3.1.1 胰腺癌石蜡组织及组织芯片
        3.1.2 细胞株及其培养
        3.1.3 主要仪器及耗材
        3.1.4 主要试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 引物的设计
        3.2.2 细胞的培养
        3.2.3 细胞的去甲基化处理
        3.2.4 细胞总RNA的抽提
        3.2.5 RNA的逆转录
        3.2.6 实时荧光定量PCR(RT-PCR)
        3.2.7 组织芯片免疫组化(IHC)
        3.2.8 石蜡包埋组织中DNA的提取
        3.2.9 亚硫酸氢盐修饰DNA及回收
        3.2.10 甲基化特异性PCR(MS-PCR)
        3.2.11 琼脂糖电泳
        3.2.12 数据分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 IRX6在胰腺癌细胞中表达失活
        3.3.2 IRX6在胰腺癌组织中表达失活
        3.3.3 IRX6在胰腺癌组织中异常高甲基化
        3.3.4 去甲基化使IRX6在胰腺癌细胞中表达上升
4 IRX6在胰腺癌细胞中的抑癌作用
    4.1 实验材料
        4.1.1 慢病毒表达载体
        4.1.2 主要仪器耗材
        4.1.3 主要试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 IRX6过表达及shRNA表达载体的构建及稳转株的筛选
        4.2.2 细胞总蛋白的提取
        4.2.3 SDS-PAGE 及 Western blot
        4.2.4 细胞增殖实验
        4.2.5 克隆形成实验
        4.2.6 细胞毒性实验
        4.2.7 细胞迁移实验
        4.2.8 Transwell实验
    4.3 实验结果
        4.3.1 IRX6抑制胰腺癌细胞的增殖能力和克隆形成能力
        4.3.2 IRX6提高胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性
        4.3.3 IRX6抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力
        4.3.4 IRX6作用于胰腺癌细胞的EMT过程
结论
参考文献
附录A 缩略词表
附录B RT-PCR引物
附录C IRX6MS-PCR及PCR引物
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤微环境中的甲基化调节机制（英文）[J]. Meng-wen ZHANG,Kenji FUJIWARA,Xu CHE,Shu ZHENG,Lei ZHENG.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2017(05)
[2]基因组学与表观遗传学在肿瘤标志物研究中的应用[J]. 熊凯,薛丽香.  中国生物化学与分子生物学报. 2014(01)
[3]DNA甲基化与癌症[J]. 韩竞男,鲁昊骋,梁静.  中国生物化学与分子生物学报. 2012(02)

博士论文
[1]PCDH8和LRRC55基因异常甲基化在胰腺癌发病中的作用研究[D]. 吕顺莉.第二军医大学 2010



本文编号：3579011