肺炎克雷伯菌转录调控子CRP对KP1 0 324基因的转录调控研究
发布时间：2022-02-08 23:52
目的肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,K.pneumoniae）是医院感染的常见条件致病性病原体,可引起尿路感染、肺炎、败血症、化脓性肝脓肿和脑膜炎等。cAMP受体蛋白（cAMP receptor protein,CRP）是一类负责细菌转录调控的重要蛋白。生物信息学分析显示KP10324启动子区存在可能与CRP结合的保守序列,KP10324基因推测可能参与生物膜的形成。本文探究CRP对KP10324基因的调控作用以及KP10324基因对生物膜形成的影响。方法首先,对标记的KP10324片段和纯化的CRP进行体外孵育,通过凝胶迁移实验（EMSA）分析CRP与KP10324基因是否发生结合。然后,利用DNase I足迹实验测序寻找二者结合的具体碱基序列,分析其与预测结合序列的位置关系。接下来,LacZ报告基因融合实验,将构建的placZ15-p0324重组质粒分别转入CCW01和CCW01-Δcrp,通过检测β-半乳糖苷酶的活性来反映K...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
EMSA凝胶电泳结果
图 2 DNase I 足迹实验结果Fig 2 Results of DNase ICoding：标记正向引物；Non-coding：标记反向引基因融合实验果证明了CRP与KP1_0324基因能够直接结合，4 基因产生相互作用，从而调控其在细菌内的表构建了 placZ15-p0324 重组质粒，结果如图 3.1及 CCW01-Δcrp，分别如图 3.2 和 3.3 所示；苷酶活性，每株菌测量 3 组数据，利用两独立示。在缺失 crp 基因的 CCW01-Δcrp 中，β-半验证明 crp 基因能够负调控 KP1_0324 基因启
图 3.1 placZ15-p0324 质粒片段电泳图Fig 3.1 The gel electrophoresis of placZ15-p0324化子为模板，KP1_0324-lacZ-F/R 为引物对扩增得到的 1_0324-lacZ-F/R 为引物对扩增得到的 DNA 片段；3：以 000 DNAMarker。M 1 2 31 000bp2 000bp750bp500bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年CHINET中国细菌耐药性监测[J]. 胡付品,郭燕,朱德妹,汪复,蒋晓飞,徐英春,张小江,张朝霞,季萍,谢轶,康梅,王传清,王爱敏,徐元宏,沈继录,孙自镛,陈中举,倪语星,孙景勇,褚云卓,田素飞,胡志东,李金,俞云松,林洁,单斌,杜艳,郭素芳,魏莲花,邹凤梅,张泓,王春,胡云建,艾效曼,卓超,苏丹虹,汪瑞忠,房华,俞碧霞,赵勇,龚萍,郭大文,赵金英,刘文恩,李艳明,金炎,邵春红,温开镇,张贻荣,徐雪松,鄢超,喻华,黄湘宁,王山梅,楚亚菲,张利侠,马娟,周树平,周艳,朱镭,孟晋华,董芳,郑红艳,沈瀚,周万青,贾伟,李刚,吴劲松,卢月梅. 中国感染与化疗杂志. 2018(03)
[2]血流感染高致病性肺炎克雷伯菌毒力因子及分子分型特点分析[J]. 林佛君,胥志超,林志伟,郑金鑫,陈重,程航,徐广健,韩雪莹,张波,余治健,邓启文. 中国病原生物学杂志. 2018(04)
硕士论文
[1]肺炎克雷伯菌CRP突变株的构建及其生物膜表型分析[D]. 高钰双.重庆医科大学 2014
[2]cAMP受体蛋白调控肺炎克雷伯菌kfuABC操纵子的研究[D]. 杨世亚.重庆医科大学 2014
本文编号：3615989
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
EMSA凝胶电泳结果
图 2 DNase I 足迹实验结果Fig 2 Results of DNase ICoding：标记正向引物；Non-coding：标记反向引基因融合实验果证明了CRP与KP1_0324基因能够直接结合，4 基因产生相互作用，从而调控其在细菌内的表构建了 placZ15-p0324 重组质粒，结果如图 3.1及 CCW01-Δcrp，分别如图 3.2 和 3.3 所示；苷酶活性，每株菌测量 3 组数据，利用两独立示。在缺失 crp 基因的 CCW01-Δcrp 中，β-半验证明 crp 基因能够负调控 KP1_0324 基因启
图 3.1 placZ15-p0324 质粒片段电泳图Fig 3.1 The gel electrophoresis of placZ15-p0324化子为模板，KP1_0324-lacZ-F/R 为引物对扩增得到的 1_0324-lacZ-F/R 为引物对扩增得到的 DNA 片段；3：以 000 DNAMarker。M 1 2 31 000bp2 000bp750bp500bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年CHINET中国细菌耐药性监测[J]. 胡付品,郭燕,朱德妹,汪复,蒋晓飞,徐英春,张小江,张朝霞,季萍,谢轶,康梅,王传清,王爱敏,徐元宏,沈继录,孙自镛,陈中举,倪语星,孙景勇,褚云卓,田素飞,胡志东,李金,俞云松,林洁,单斌,杜艳,郭素芳,魏莲花,邹凤梅,张泓,王春,胡云建,艾效曼,卓超,苏丹虹,汪瑞忠,房华,俞碧霞,赵勇,龚萍,郭大文,赵金英,刘文恩,李艳明,金炎,邵春红,温开镇,张贻荣,徐雪松,鄢超,喻华,黄湘宁,王山梅,楚亚菲,张利侠,马娟,周树平,周艳,朱镭,孟晋华,董芳,郑红艳,沈瀚,周万青,贾伟,李刚,吴劲松,卢月梅. 中国感染与化疗杂志. 2018(03)
[2]血流感染高致病性肺炎克雷伯菌毒力因子及分子分型特点分析[J]. 林佛君,胥志超,林志伟,郑金鑫,陈重,程航,徐广健,韩雪莹,张波,余治健,邓启文. 中国病原生物学杂志. 2018(04)
硕士论文
[1]肺炎克雷伯菌CRP突变株的构建及其生物膜表型分析[D]. 高钰双.重庆医科大学 2014
[2]cAMP受体蛋白调控肺炎克雷伯菌kfuABC操纵子的研究[D]. 杨世亚.重庆医科大学 2014
本文编号：3615989
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