SLC12A3基因Arg913Gln促进中国2型糖尿病终末期肾病的发生和进展

发布时间：2022-02-10 02:17

　　目的:SLC12A3,是钠和氯化物共转运蛋白,负责调节钠和氯化物在肾脏远端小管中的重吸收,与血压的调节相关,并作为噻嗪类利尿剂的作用靶点。SLC12A3的Arg913Gln变异（rs11643718,G/A）是否促进2型糖尿病肾脏病（DKD）的发病仍存在争议。我们进行病例-对照研究,以评估SLC12A3 Arg913Gln变异与中国接受维持性血液透析治疗的2型糖尿病（T2DM）患者发生终末期肾病（ESRD）风险的相关性,并分析基因型-表型间的相互作用。研究设计和方法:将合并糖尿病视网膜病、无血缘关系的中国T2DM患者（n=372）分为非糖尿病肾脏病对照组（non-DKD组,n=151,糖尿病病程>15年,无肾病）和T2DM导致的ESRD组（DKD-ESRD组,n=221,终末期肾病接受维持性血液透析治疗）。应用PCR-直接测序方法,对所有372名受试者的SLC12A3-Arg913Gln变异进行基因型分型。结果:1)DKD-ESRD组患者的GA+AA基因型频率显著高于非DKD对照组[23.1%vs.9.9%;校正OR值为2.2（95%CI,1.3-4.5;P=0.019）];2)... 

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PCR实验原理图

上海交通大学博士学位论文17表4.SLC12A3Arg913GlnG/APCR反应体系。Table4.PCRreactionsystemforSLC12A3Arg913GlnG/A.试剂体积（μl）10×PCR缓冲液250mmol/LMgCl20.82mmol/LdNTP210pm/μl正向引物210pm/μl反向引物25U/μLTaqDNA聚合酶0.230ng/μlDNA模板1DMSO1ddH209总反应体积20⑺PCR扩增反应条件见图2图2.SLC12A3Arg913GlnG/A的PCR扩增反应条件Figure2.PCRreactionconditionsforSLC12A3Arg913GlnG/A⑻凝胶电泳方法鉴定PCR扩增反应产物实验操作步骤如下：①7μl2.5*loadingbuffer+3μlPCR产物反复吹打混匀，加样于12%聚丙烯酰胺凝胶的加样孔中，同时以DNALadderMaker作为分子量参照。

上海交通大学博士学位论文20用完毕即关闭镜头电源；严禁用粗硬的物品擦拭紫外台，防止划伤；切胶时在紫外透射台上铺一层保险膜再放置凝胶，以防止切刀划伤紫外台。2.3.4直接测序法鉴定SLC12A3Arg913GlnG/A变异基因型⑴直接测序反应上机前PCR反应体系（见表5）表5.SLC12A3Arg913GlnG/A直接测序反应体系。Table5.ThedirectsequencereactionsystemforSLC12A3-Arg913GlnG/A.试剂体积（μl）已纯化的PCR产物2.51pmol/l正向或反向引物35×Sequence缓冲液3Big-Dye0.5ddH2011总体积20⑵测序反应条件如图3所示。图3.SLC12A3Arg913GlnG/A直接测序扩增反应条件。Figure3.ThedirectsequencereactionconditionforSLC12A3Arg913GlnG/A.⑶直接测序反应前产物的纯化及处理用醋酸钠/乙醇法进行，室温下晾干已纯化的测序反应产物，操作步骤如下：a．将100μl醋酸钠溶液加入到上述直接测序扩增反应结束后的产物中，将混合物转移至对应的96孔测序板之前，应提前在板上做好标记：横向标记为1-12；

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本文编号：3618070