miR-6857-3p对人巨噬细胞Sp110基因调控的功能学研究

发布时间：2022-02-12 07:28

　　目的:1.通过生物信息学网站预测靶向Sp110的microRNA（miRNA）。2.通过在THP-1细胞中检测miRNA本底水平进一步筛选miRNA。3.应用双荧光素酶实验验证miR-6857-3p和Sp110存在靶向关系。4.应用实时荧光定量PCR（qPCR）技术研究miR-6857-3p对Sp110的调控作用。5.研究miR-6857-3p对卡介苗感染的巨噬细胞凋亡的影响。方法:1.用生物信息学网站（TargetScan、miRDB和miRTarBase）预测可能和Sp110具有靶向关系的miRNA（miR-6857-3p、miR-19a-5p、miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-5696）。2.提取人巨噬细胞（THP-1细胞）中的总RNA,将miRNA反转录为cDNA,应用qPCR技术检测先前预测的5种miRNA的本底表达水平,采用2^-△ct法计算相对表达量,筛选表达量最高的3种miRNA（miR-6857-3p、miR-4659-5p和miR-4772-3p）进行双荧光素酶实验。3.从数据库中获取miR-6857-3p、miR-4659... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区211工程院校

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【学位级别】：硕士

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Sp110基因的研究进展Figure1ResearchprogressofSp110gene

miR-6857-3p对人巨噬细胞Sp110基因调控的功能学研究3图2Mtb感染巨噬细胞后miRNA及Sp110部分作用机制图Figure2PartialmechanismofmiRNAandSp110afterMtbinfectionofmacrophages5.miR-6857-3p和Sp110基因的研究我们发现很多miRNA的异常表达都可能调控基因的表达，并在结核病的产生、发展及宿主细胞抗结核反应中发挥重要作用。我们通过mirbase、TargetScan等数据库预测出可能靶向Sp110基因的miR-6857-3p、miR-19a-5p、miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-5696，之后实验研究发现，THP-1细胞株中miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-6857-3p的本底表达水平较高，并且miR-6857-3p的表达水平最高，目前miR-6857-3p和Sp110基因是否存在靶向调控关系尚未见报道。因此，本实验我们通过双荧光素酶报告系统验证miR-6857-3p和Sp110之间是否存在靶向关系，并且通过将化学合成的小分子miRNAmimic及inhibitor导入THP-1细胞，应用实时荧光定量PCR技术，研究miR-6857-3p对Sp110基因的调控作用，这可能为将来针对结核病的潜在治疗干预提供有用的信息。

miR-6857-3p对人巨噬细胞Sp110基因调控的功能学研究163.结果3.1预测靶向Sp110的miRNA为了预测靶向Sp110基因的miRNA，我们使用了TargetScan、miRDB和miRTarBase预测网站进行联合分析（见图3）。由于三个网站交集数量较少，并且不同数据库使用的算法及收录的miRNA不同，各数据库之间的预测结果具有很大差异，因此我们筛选至少在两个网站中都预测的miRNA，通过两者间种子区域匹配方式及在miRTarBase数据库中是否已进行验证，我们最终认为miR-6857-3p、miR-19a-5p、miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-5696可能靶向作用于Sp110基因。并且在TargetScan数据库中分别找出其与Sp110基因的结合位点（见图4）。其中miR-4659-5p、miR-4772-3p和miR-19a-5p在miRTarBase网站中显示已通过NGS测序技术进行验证（见图5），但证据不够充分，因此还需进一步实验进行验证。图33个预测数据库联合韦恩图Figure3JointWaynediagramofthreepredictiondatabases图4预测的5个miRNA与Sp110基因的结合位点Figure4PredictedbindingsitesofthefivemiRNAstotheSp110gene

【参考文献】：
期刊论文
[1]新疆地区2006—2016年肺结核报告发病和死亡情况分析[J]. 赵珍,陈鹏,依帕尔·艾海提,刘年强.  中国公共卫生. 2018(11)



本文编号：3621292