儿童粪便中四环素耐药菌分离鉴定及四环素耐药基因分析
发布时间：2022-02-15 06:52
目的分离鉴定儿童粪便中四环素耐药菌,了解四环素耐药基因的分布与特点。方法使用多种四环素选择性培养基培养儿童粪便,分离四环素耐药菌株;采用16S rRNA基因PCR扩增技术鉴定细菌;K-B纸片扩散法和琼脂稀释法进行四环素药敏试验;PCR技术检测细菌携带tet（A）、tet（B）、tet（G）、tet（L）、tet（M）、tet（O）、tet（Q）、tet（W） 8种四环素耐药基因的情况。结果采用四环素选择性培养基共分离、鉴定了184株细菌;药敏试验结果显示172株细菌为耐药菌,12株为敏感菌;184株细菌中耐药基因总检出率为83.2%,敏感菌均未检测到任何耐药基因;大肠杆菌主要携带tet（A）和tet（B）,肠球菌全部携带tet（M）,双歧杆菌和产气柯林斯菌全部检测到tet（W）;携带tet（B）基因的大肠杆菌药敏抑菌圈明显小于携带tet（A）基因的大肠杆菌（P<0.05）。结论四环素耐药菌和耐药基因广泛存在于检测儿童粪便样本中,并呈现个体差异;肠道菌耐药与携带耐药基因有关,且耐药基因的种类具有种属特异性;大肠杆菌携带不同耐药基因可呈现出不同耐药强度。
【文章来源】：遵义医科大学学报. 2020,43(04)
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
部分菌株革兰氏染色结果(倍数10 ×100)
所有细菌均进行TC药敏试验,部分TC药敏结果如图2。由药敏试验结果(见表5)可知,184株细菌表型耐药率为93.5%,表型敏感率为6.5%,无中介率。大肠杆菌耐药率为91.8%,肠球菌、双歧杆菌、产气科特斯菌、迟缓埃格特菌耐药率均为100%。9株敏感大肠杆菌均来Z-1样本,另外3株敏感菌来自Z-3和Z-4。全部细菌药敏试验统计结果见表5。表5 184株细菌四环素药敏试验结果 样本 细菌 数量 耐药 中介 敏感 Z-1 大肠杆菌 32 23 0 9 希拉肠球菌 19 19 0 0 屎肠球菌 6 6 0 0 溶酪大球菌 1 1 0 0 产气柯林斯菌 4 4 0 0 吉氏拟杆菌 1 1 0 0 Z-2 大肠杆菌 18 18 0 0 屎肠球菌 18 18 0 0 青春双歧杆菌 4 4 0 0 Z-3 大肠杆菌 28 28 0 0 屎肠球菌 1 1 0 0 希拉肠球菌 1 1 0 0 鲁氏不动杆菌 1 1 0 0 西伯利亚库特氏菌 1 0 0 1 假小链双歧杆菌 3 3 0 0 长双歧杆菌 5 5 0 0 Z-4 大肠杆菌 20 20 0 0 鸟肠球菌 11 11 0 0 酪黄肠球菌 1 1 0 0 科氏葡萄球菌科氏亚种 1 0 0 1 粪嗜冷杆菌 1 1 0 0 吉氏库特氏菌 1 0 0 1 产氨棒杆菌 1 1 0 0 表皮短杆菌 1 1 0 0 迟缓埃格特菌 4 4 0 0 总数 184 172 0 12
根据PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果判断是否扩增出目标耐药基因,部分菌株耐药基因PCR产物电泳结果见图3。如表6、7所示,184株细菌中耐药基因总检出率为83.2%,12株TC敏感菌未检出任何耐药菌基因;其中tet(B)、tet(M)、tet(Q)、tet(W)、tet(A)检出率分别为18.5%、32.1%、0.5%、8.7%、23.4%,未检出耐药基因比例为16.8%;172株耐药菌中耐药基因检出率为89.0%,其中大肠杆菌主要检测出tet(A)和tet(B),肠球菌全部检测到tet(M),双歧杆菌全部检测到tet(W),产气柯林斯菌全部检出tet(W),19株耐药菌(11.0%)未检测到上述8种基因;所有细菌均未检测到2种以上的耐药基因,无细菌扩增出tet(G)、tet(L)、tet(O)。表6 四环素敏感菌耐药基因PCR扩增结果 样本 细菌(数量) tet(B) tet(M) tet(Q) tet(W) tet(A) tet(G) tet(L) tet(O) Z-1 大肠杆菌(9) 0 0 0 0 0 0 0 0 Z-2 无 0 0 0 0 0 0 0 0 Z-3 西伯利亚库特氏菌(1) 0 0 0 0 0 0 0 0 Z-4 科氏葡萄球菌科氏亚种(1) 0 0 0 0 0 0 0 0 吉氏库特氏菌(1) 0 0 0 0 0 0 0 0 总数 12 0 0 0 0 0 0 0 0
【参考文献】：
期刊论文
[1]四环素类抗生素在环境中的风险评估研究进展[J]. 徐向月,马文瑾,安博宇,程古月,黄玲利. 中国畜牧兽医. 2020(03)
[2]四环素类耐药基因在不同国家人体、动物和环境微生态中的多样性[J]. 张婷婷,苗娇娇,强裕俊,李秀文,彭贤慧,张雯,韩娜. 中国感染控制杂志. 2019(09)
[3]革兰氏染色法观察与区分细菌[J]. 谭啸,章熙东. 生物学教学. 2019(07)
[4]污水处理厂中四环素和磺胺类抗生素抗性基因的分布、传播及去除[J]. 王国兰,冯金露,罗玲,楼莉萍. 应用生态学报. 2019(08)
[5]细菌的生理代谢与耐药及其对抗菌药物研发的启示[J]. 张骏梁,钱鎏佳,徐颖,陈代杰. 药学进展. 2018(06)
[6]细菌持留与抗生素表型耐药机制[J]. 崔鹏,许涛,张文宏,张颖. 遗传. 2016(10)
[7]16S rRNA基因序列分析法鉴定病原细菌[J]. 朱飞舟,陈利玉,陈汉春. 中南大学学报(医学版). 2013(10)
本文编号：3626138
【文章来源】：遵义医科大学学报. 2020,43(04)
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
部分菌株革兰氏染色结果(倍数10 ×100)
所有细菌均进行TC药敏试验,部分TC药敏结果如图2。由药敏试验结果(见表5)可知,184株细菌表型耐药率为93.5%,表型敏感率为6.5%,无中介率。大肠杆菌耐药率为91.8%,肠球菌、双歧杆菌、产气科特斯菌、迟缓埃格特菌耐药率均为100%。9株敏感大肠杆菌均来Z-1样本,另外3株敏感菌来自Z-3和Z-4。全部细菌药敏试验统计结果见表5。表5 184株细菌四环素药敏试验结果 样本 细菌 数量 耐药 中介 敏感 Z-1 大肠杆菌 32 23 0 9 希拉肠球菌 19 19 0 0 屎肠球菌 6 6 0 0 溶酪大球菌 1 1 0 0 产气柯林斯菌 4 4 0 0 吉氏拟杆菌 1 1 0 0 Z-2 大肠杆菌 18 18 0 0 屎肠球菌 18 18 0 0 青春双歧杆菌 4 4 0 0 Z-3 大肠杆菌 28 28 0 0 屎肠球菌 1 1 0 0 希拉肠球菌 1 1 0 0 鲁氏不动杆菌 1 1 0 0 西伯利亚库特氏菌 1 0 0 1 假小链双歧杆菌 3 3 0 0 长双歧杆菌 5 5 0 0 Z-4 大肠杆菌 20 20 0 0 鸟肠球菌 11 11 0 0 酪黄肠球菌 1 1 0 0 科氏葡萄球菌科氏亚种 1 0 0 1 粪嗜冷杆菌 1 1 0 0 吉氏库特氏菌 1 0 0 1 产氨棒杆菌 1 1 0 0 表皮短杆菌 1 1 0 0 迟缓埃格特菌 4 4 0 0 总数 184 172 0 12
根据PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果判断是否扩增出目标耐药基因,部分菌株耐药基因PCR产物电泳结果见图3。如表6、7所示,184株细菌中耐药基因总检出率为83.2%,12株TC敏感菌未检出任何耐药菌基因;其中tet(B)、tet(M)、tet(Q)、tet(W)、tet(A)检出率分别为18.5%、32.1%、0.5%、8.7%、23.4%,未检出耐药基因比例为16.8%;172株耐药菌中耐药基因检出率为89.0%,其中大肠杆菌主要检测出tet(A)和tet(B),肠球菌全部检测到tet(M),双歧杆菌全部检测到tet(W),产气柯林斯菌全部检出tet(W),19株耐药菌(11.0%)未检测到上述8种基因;所有细菌均未检测到2种以上的耐药基因,无细菌扩增出tet(G)、tet(L)、tet(O)。表6 四环素敏感菌耐药基因PCR扩增结果 样本 细菌(数量) tet(B) tet(M) tet(Q) tet(W) tet(A) tet(G) tet(L) tet(O) Z-1 大肠杆菌(9) 0 0 0 0 0 0 0 0 Z-2 无 0 0 0 0 0 0 0 0 Z-3 西伯利亚库特氏菌(1) 0 0 0 0 0 0 0 0 Z-4 科氏葡萄球菌科氏亚种(1) 0 0 0 0 0 0 0 0 吉氏库特氏菌(1) 0 0 0 0 0 0 0 0 总数 12 0 0 0 0 0 0 0 0
【参考文献】：
期刊论文
[1]四环素类抗生素在环境中的风险评估研究进展[J]. 徐向月,马文瑾,安博宇,程古月,黄玲利. 中国畜牧兽医. 2020(03)
[2]四环素类耐药基因在不同国家人体、动物和环境微生态中的多样性[J]. 张婷婷,苗娇娇,强裕俊,李秀文,彭贤慧,张雯,韩娜. 中国感染控制杂志. 2019(09)
[3]革兰氏染色法观察与区分细菌[J]. 谭啸,章熙东. 生物学教学. 2019(07)
[4]污水处理厂中四环素和磺胺类抗生素抗性基因的分布、传播及去除[J]. 王国兰,冯金露,罗玲,楼莉萍. 应用生态学报. 2019(08)
[5]细菌的生理代谢与耐药及其对抗菌药物研发的启示[J]. 张骏梁,钱鎏佳,徐颖,陈代杰. 药学进展. 2018(06)
[6]细菌持留与抗生素表型耐药机制[J]. 崔鹏,许涛,张文宏,张颖. 遗传. 2016(10)
[7]16S rRNA基因序列分析法鉴定病原细菌[J]. 朱飞舟,陈利玉,陈汉春. 中南大学学报(医学版). 2013(10)
本文编号：3626138
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