肌萎缩侧索硬化症相关基因CREST在蛋白质降解系统中起关键作用（英文）

发布时间：2022-04-19 18:24

　　蛋白质降解系统的紊乱可能是神经退行性疾病的关键致病机制之一。肌萎缩侧索硬化症（ALS）就是一类严重的神经退行性疾病。本研究旨在探索我们新报道的ALS相关基因CREST是否会影响蛋白质降解系统。我们构建了人源CREST的表达质粒或鼠源CREST shRNA的质粒,并将其转染到293细胞或从胚胎期C57BL/6小鼠分离培养的原代皮层神经元中,以此制备实验样品。使用分子生物学和生物化学方法,分析了CREST对蛋白质降解系统的影响,包括泛素蛋白酶体系统（UPS）和自噬流。利用UPS的GFP指示剂,发现过表达CREST会导致293细胞中GFP阳性信号显著降低。但CREST的过表达却不影响293细胞或培养的皮层神经元中的自噬流。然而,无论在是否使用影响自噬流药物的情况下,降低CREST的蛋白水平都能抑制培养神经元中LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化（P<0.05）。不仅如此,LC3-Ⅱ与Ⅰ的比值在表达CREST的ALS相关突变（CREST-Q388X）的皮层神经元中显著上升（P<0.05）。上述结果表明,CREST可能在蛋白质降解系统中发挥关键作用,包括促进UPS以及维持自噬的正常功能,而在... 

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【文章目录】：
1 Materials and Methods
    1.1 Plasmid construction
    1.2 Cell culture
    1.3 Western blotting
    1.4 Immunofluorescence
    1.5 Statistical analysis
2 Results
    2.1 CREST may promote the activity of ubiquitin proteasome systems in 293 cell lines
    2.2 Overexpression of wild-type CREST may not affect autophagic flux in cultured cells
    2.3 CREST may be necessary for maintaining normal autophagic flux in cultured cortical neurons
    2.4 The LC3-Ⅱ/Ⅰ ratios are increased in CREST-Q388X mutant-expressing cortical neurons
3 Discussion



本文编号：3646403