慢病毒介导的AP-1基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡及Survivin表达影响的研究

发布时间：2022-04-19 20:08

　　目的探讨慢病毒介导的AP-1基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡以及Survivin表达的影响。方法基于RNA干扰技术构建慢病毒载体AP-1-shRNA,测定病毒滴度。实时荧光定量PCR及Western blot验证并筛选AP-1-shRNA沉默AP-1效果。将沉默效果最佳的载有AP-1-shRNA的慢病毒感染SKOV3细胞作为实验组,未感染病毒及感染空载体病毒SKOV3细胞作为对照组,用MTT法及Annexin V-APC观察SKOV3细胞增殖、凋亡情况,并用实时荧光定量PCR、Western blot检测SKOV3细胞Survivin表达。结果经测序证实,成功构建AP-1-shRNA-1/2/3三组慢病毒,病毒滴度均大于2×10⁸ TU/mL。实时荧光定量PCR及Western blot验证三组病毒均能在mRNA及蛋白水平沉默AP-1的表达,其中AP-1-shRNA-3沉默效果最佳,用于后续实验。沉默AP-1后,SKOV3细胞增殖受到抑制、凋亡增加、Survivin mRNA转录水平和蛋白表达水平降低。结论慢病毒介导的AP-1基因沉默可致卵巢癌SKOV3细... 

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞及主要主要试剂
    1.2 制备RNA干扰慢病毒
    1.3 慢病毒包装和病毒滴度的测定
    1.4 慢病毒感染SKOV3细胞
    1.5 细胞分组
    1.6 MTT检测SKOV3细胞增殖
    1.7 流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡
    1.8 实时荧光定量PCR检测SKOV3细胞Survivin mRNA表达
    1.9 Western Blot检测SKOV3细胞Survivin蛋白表达
    1.10 统计学处理
2 结果
    2.1 重组干扰载体酶切及测序鉴定结果
    2.2 慢病毒滴度测定
    2.3 慢病毒感染SKOV3细胞阳性率测定
    2.4 AP-1-shRNA在mRNA及蛋白水平沉默AP-1效果
    2.5 MTT法检测SKOV3细胞增殖情况
    2.6 流式细胞术检测细胞凋亡
    2.7 实时荧光定量PCR检测SKOV3细胞Survivin mRNA表达情况
    2.8 Western Blot检测SKOV3细胞Survivin蛋白表达水平
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]survivin基因表达与胃癌患者对奥沙利铂耐药的关系分析[J]. 国强,白雪峰,周勇慧.  实用癌症杂志. 2019(12)
[2]卵巢癌组织中REG4与survivin的蛋白表达及临床意义[J]. 杜琳,陈颖,张岩.  现代肿瘤医学. 2019(11)
[3]AP-1与甲状腺癌相关研究进展状[J]. 肖成,刘瑧.  现代肿瘤医学. 2019(06)
[4]miR-148b-3p在前列腺癌细胞增殖和迁移中的作用机制[J]. 龚化,周治军,卢童,徐康,鲁文.  遵义医学院学报. 2018(04)
[5]卵巢癌中存活素和表皮生长因子受体的表达及临床意义[J]. 倪群琴,何君君,徐萍.  中国慢性病预防与控制. 2017(12)
[6]米诺环素对人类胶质瘤U87和LN229细胞体外增殖及凋亡的影响[J]. 赵海龙,严婉约,李巧巧,李科,刘丽,李丽娟.  遵义医学院学报. 2017(05)
[7]Survivin与卵巢癌相关性的研究现状[J]. 谷毅博,刘萍,杜海燕,郭海荣.  中国医学创新. 2015(28)

博士论文
[1]转录因子AP-1通过增强新型神经营养因子MANF表达抑制肝癌细胞的增殖和迁移[D]. 王昌会.安徽医科大学 2016

硕士论文
[1]凋亡调控因子Survivin、XIAP以及c-Jun、NF-κB在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义[D]. 邓霖.遵义医学院 2011



本文编号：3646558