拟穴青蟹Myosin-9基因在先天性免疫中的作用研究
发布时间：2022-04-20 20:24
肌球蛋白（Myosin）是肌原纤维粗丝的重要组成部分,广泛存在于机体的各个组织器官中。本试验中我们探究在拟穴青蟹在感染白斑综合征病毒（White Spot Syndrome Virus,WSSV）或溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）后,在青蟹的先天免疫过程中Myosin-9基因所起到的作用。运用cDNA末端快速扩增技术（Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE）,成功获得Myosin-9基因的序列,该序列长为2735 bp,其中开放阅读框（ORF）长为2145 bp,编码715个氨基酸。经过氨基酸序列比对和进化树分析,结果显示该基因与凡纳滨对虾（Penaeus vannamei）亲缘关系较近。检测Myosin-9基因在各个组织中的表达量,结果显示Myosin-9基因在肌肉的表达量最高,在心脏、血淋巴、性腺中次之,鳃、肝胰腺等组织内表达量较低。通过构建Myosin-9基因的dsRNA表达载体,利用dsRNA抑制Myosin-9基因的表达,拟穴青蟹的多个已知免疫相关基因的表达受到影响,其中C-type-lectin的表达量显著提高,Tol...
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拟穴青蟹Myosin-9与其他物种的氨基酸序列比对Fig.2ComparationofS.paramamosainMyosin-9aminoacidsequencewithotherspecies
17图 3 Myosin-9 基因进化树Fig.3 The phylogenetic tree of Myosin-91.4 讨论本试验中，通过从 NCBI 上下载不同物种的 Myosin-9 基因序列，寻找保守区间设计引物，通过 PCR 技术获得核心序列后，通过 RACE 技术设计特异性引物，成功取得 Myosin-9 基因的序列，序列长度为 2735 bp，开放阅读框大小为 2145bp，编码一个 775 个氨基酸残基的蛋白质。在获得 Myosin-9 基因序列后，可以利用该序列设计荧光定量 PCR 的引物，设计干扰序列对 Myosin-9 基因进行敲低，为研究 Myosin-9 基因功能的探究奠定坚实的基础，也为其它无脊椎动物包括其余蟹类的 Myosin-9基因的克隆提供了一定的参考价值。
图 4 Myison-9 基因在各组织中的表达量Fig.4Expression levels of Myison-9 gene in varioustissuessRNA 体外试验干扰 Myosin-9表达yosin-9-dsRNA 质粒构建特异性引物，引物上加入酶切位点，扩增除拟穴青蟹 Myison-9 基因部双酶切技术和 T4 DNA Ligase 连接酶将这基因片段转化到 HT115 感受过测序的验证，证明了 Myosin-9-L38i 重组质粒构建完成，可用于后续Myosin-9-L38i3172 bpMyosin-9oriT7 promoterT7 promoterSalⅠ（439）HindIII (1)Apa LI (2668)
【参考文献】：
期刊论文
[1]溶藻弧菌对水产动物致病性及其防治的研究进展[J]. 苑淑宾,朱爱意. 浙江海洋学院学报(自然科学版). 2012(03)
[2]白斑综合征病毒（WSSV）在拟穴青蟹体内增殖的研究[J]. 周俊芳,房文红,胡琳琳,周帅,李新苍,朱磊. 海洋渔业. 2012(01)
[3]甲壳动物免疫系统概述及其图论表示[J]. 马寨璞,张繁霜,佟霁坤. 安徽农业科学. 2011(01)
[4]锯缘青蟹混合感染症致病菌的分离鉴定与感染治疗[J]. 夏小安,吴清洋,李远友,王树启,游翠红,林尤顺. 热带海洋学报. 2010(05)
[5]无脊椎动物免疫分子的多态性[J]. 章跃陵,赵贤亮,严芳. 中国生物化学与分子生物学报. 2010(03)
[6]WSSV对锯缘青蟹的致病性及血清酶指标影响[J]. 刘问,钱冬,潘清清,严小军. 水生生物学报. 2009(06)
[7]无脊椎动物体液免疫研究进展[J]. 曾祥兴,张驰,李康生. 微生物学免疫学进展. 2009(03)
[8]甲壳动物体液免疫相关酶及免疫因子研究概况[J]. 管晓娟. 生命科学仪器. 2009(06)
[9]虾池养殖拟穴青蟹技术[J]. 彭银辉,蔡德健,阎冰,童万平. 中国水产. 2009(06)
[10]锯缘青蟹疾病研究进展[J]. 王荣智,郑嘉熙,汪世华. 武汉工业学院学报. 2008(03)
硕士论文
[1]日本对虾类甲壳肽（crustin-like）基因在溶藻弧菌和白斑综合征病毒感染过程中的作用机制研究[D]. 孙保贞.浙江农林大学 2017
本文编号：3646597
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拟穴青蟹Myosin-9与其他物种的氨基酸序列比对Fig.2ComparationofS.paramamosainMyosin-9aminoacidsequencewithotherspecies
17图 3 Myosin-9 基因进化树Fig.3 The phylogenetic tree of Myosin-91.4 讨论本试验中，通过从 NCBI 上下载不同物种的 Myosin-9 基因序列，寻找保守区间设计引物，通过 PCR 技术获得核心序列后，通过 RACE 技术设计特异性引物，成功取得 Myosin-9 基因的序列，序列长度为 2735 bp，开放阅读框大小为 2145bp，编码一个 775 个氨基酸残基的蛋白质。在获得 Myosin-9 基因序列后，可以利用该序列设计荧光定量 PCR 的引物，设计干扰序列对 Myosin-9 基因进行敲低，为研究 Myosin-9 基因功能的探究奠定坚实的基础，也为其它无脊椎动物包括其余蟹类的 Myosin-9基因的克隆提供了一定的参考价值。
图 4 Myison-9 基因在各组织中的表达量Fig.4Expression levels of Myison-9 gene in varioustissuessRNA 体外试验干扰 Myosin-9表达yosin-9-dsRNA 质粒构建特异性引物，引物上加入酶切位点，扩增除拟穴青蟹 Myison-9 基因部双酶切技术和 T4 DNA Ligase 连接酶将这基因片段转化到 HT115 感受过测序的验证，证明了 Myosin-9-L38i 重组质粒构建完成，可用于后续Myosin-9-L38i3172 bpMyosin-9oriT7 promoterT7 promoterSalⅠ（439）HindIII (1)Apa LI (2668)
【参考文献】：
期刊论文
[1]溶藻弧菌对水产动物致病性及其防治的研究进展[J]. 苑淑宾,朱爱意. 浙江海洋学院学报(自然科学版). 2012(03)
[2]白斑综合征病毒（WSSV）在拟穴青蟹体内增殖的研究[J]. 周俊芳,房文红,胡琳琳,周帅,李新苍,朱磊. 海洋渔业. 2012(01)
[3]甲壳动物免疫系统概述及其图论表示[J]. 马寨璞,张繁霜,佟霁坤. 安徽农业科学. 2011(01)
[4]锯缘青蟹混合感染症致病菌的分离鉴定与感染治疗[J]. 夏小安,吴清洋,李远友,王树启,游翠红,林尤顺. 热带海洋学报. 2010(05)
[5]无脊椎动物免疫分子的多态性[J]. 章跃陵,赵贤亮,严芳. 中国生物化学与分子生物学报. 2010(03)
[6]WSSV对锯缘青蟹的致病性及血清酶指标影响[J]. 刘问,钱冬,潘清清,严小军. 水生生物学报. 2009(06)
[7]无脊椎动物体液免疫研究进展[J]. 曾祥兴,张驰,李康生. 微生物学免疫学进展. 2009(03)
[8]甲壳动物体液免疫相关酶及免疫因子研究概况[J]. 管晓娟. 生命科学仪器. 2009(06)
[9]虾池养殖拟穴青蟹技术[J]. 彭银辉,蔡德健,阎冰,童万平. 中国水产. 2009(06)
[10]锯缘青蟹疾病研究进展[J]. 王荣智,郑嘉熙,汪世华. 武汉工业学院学报. 2008(03)
硕士论文
[1]日本对虾类甲壳肽（crustin-like）基因在溶藻弧菌和白斑综合征病毒感染过程中的作用机制研究[D]. 孙保贞.浙江农林大学 2017
本文编号：3646597
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3646597.html
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