PIWI/piRNA通路相关基因在肝癌中表达调控作用的研究
发布时间：2022-04-26 18:51
目的:检测肝癌动物模型组织和肝癌细胞中PIWI/piRNA通路相关Piwil4、Piwil2、Mael、Ddx4基因mRNA和蛋白的表达水平变化,探讨PIWI/piRNA通路基因与肝癌的关系;将肝癌细胞系中Piwil4基因进行敲除,构建基因敲除的细胞系,检测Piwil4的表达、敲除细胞系的凋亡水平、细胞增殖能力,探讨PIWIL4对肝癌细胞凋亡和增殖能力的影响。方法:（1）大鼠肝癌动物模型的建立及应用酶联免疫吸附（ELISA）技术检测肿瘤标记物在模型动物血清中的水平变化。（2）釆用qRT-PCR、Western-blot和免疫组织化学法检测肝癌动物模型肝脏组织PIWI/piRNA通路相关基因Piwil2、Piwil4、Mael和Ddx4的mRNA及蛋白表达水平变化。（3）大鼠肝癌细胞（CBRH-7919）和大鼠正常肝细胞（BRL）体外培养,用qRT-PCR和Western-blot法检测PIWI/piRNA通路相关基因Piwil2、Piwil4、Mael和Ddx4的mRNA和蛋白表达水平变化。（4）利用CRISPR/Cas9技术对CBRH-7919细胞的Piwil4基因进行敲除,应用We...
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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结 果1 大鼠肝癌模型建立及 Piwil2、Piwil4、Mael、Ddx4 基因表达水平1.1 各组肝组织病理形态特征成功建立大鼠肝癌模型，正常对照组大鼠肝组织细胞结构完整，肝细胞排列规则，呈索状，肝细胞呈多边形，胞浆均匀，细胞核形态正常，无异常变化。肝小叶结构正常，未见纤维间隔，未见细胞水肿，未见坏死肝细胞（图 2A）。肝癌模型组大鼠肝细胞呈多角形，异型性明显，胞浆丰富，嗜酸性，核大，圆形有清楚的核仁。分化差异癌细胞异型性明显，常有巨核及多核瘤细胞。癌细胞排列成条索状、巢状或呈腺管样，周围有血管内皮包绕（图 2 B）。
新疆医科大学硕士学位论文 肝癌模型组织中 Piwil2、Piwil4、Mael 和 Ddx4 mRNA化扩增曲线中（图 4A、C、E、G、I）可见所有样品均已进入平台期，说明。溶解曲线中（图 4B、D、F、H、J）可见都是单峰，未见杂峰，扩增产基因所选的荧光定量 PCR 引物具有特异性。结果用 2-△△Ct表示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas9系统敲除TET2基因对HepG2细胞增殖和凋亡的影响[J]. 于声,杨玲凤,兰可,谢汶志,岑海燕,姜伯劲,段斯亮. 基因组学与应用生物学. 2018(06)
[2]敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建[J]. 黄晏军,郑艺,汤长宁,刘金河,刘杰麟. 贵州医科大学学报. 2018(05)
[3]非编码RNA与肿瘤发生发展的关系[J]. 李萍,谢小兵. 中华检验医学杂志. 2018 (03)
[4]NPAS2基因敲除的HepG2细胞系构建及其对肝癌细胞凋亡的影响[J]. 李波,刘峰舟,刘明莉,李嘉琦,杨懿,宋子煜,张洪新,牟佼. 现代生物医学进展. 2017(29)
[5]PIWI/piRNA的生物学功能及在肿瘤中的作用[J]. 刘啸白,马珺,薛一雪,刘丽波,郑健,李志清,刘云会. 解剖科学进展. 2017(04)
[6]肝癌相关差异表达基因的生物信息学分析[J]. 白文萱,高健,钱程,张献全. 中华肝脏病杂志. 2017 (06)
[7]Piwi-interacting RNA在肿瘤中的研究进展[J]. 丁梦婷,张蒙,蔡志明. 肿瘤防治研究. 2016(09)
[8]piRNA/PIWI在肝癌发生发展中的机制研究进展[J]. 周代兵,张凌云,许国雄. 肝脏. 2016(08)
[9]DDX4（VASA）在卵巢癌中的表达及其临床意义[J]. 徐景波,朱安颖,孙子茜,王娟娟,邱浩,洪承皎,徐岚,陈友国. 南通大学学报(医学版). 2016(04)
[10]piRNA的功能研究进展[J]. 崔东亚,王佳佳,何顺民. 生理科学进展. 2016(03)
博士论文
[1]DDX46基因在食管鳞癌中的表达及其与食管鳞癌相关性研究[D]. 李斌.兰州大学 2016
硕士论文
[1]癌—睾丸抗原MAEL在结直肠癌中的表达及其临床意义[D]. 杨扬.湖南师范大学 2016
[2]下调MAEL和上调CDH1基因表达抑制肝癌HepG2细胞的迁移和增殖研究[D]. 芦庭秀.青岛大学 2015
[3]沉默Piwil2增强子宫颈癌细胞对顺铂敏感性的机制研究[D]. 程敏.安徽医科大学 2013
[4]MAEL基因在乳腺癌中的表达及相互作用蛋白的筛选[D]. 周求知.湖南师范大学 2011
[5]PIWIL4基因对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响及其机制研究[D]. 苏畅.天津医科大学 2010
本文编号：3648541
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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结 果1 大鼠肝癌模型建立及 Piwil2、Piwil4、Mael、Ddx4 基因表达水平1.1 各组肝组织病理形态特征成功建立大鼠肝癌模型，正常对照组大鼠肝组织细胞结构完整，肝细胞排列规则，呈索状，肝细胞呈多边形，胞浆均匀，细胞核形态正常，无异常变化。肝小叶结构正常，未见纤维间隔，未见细胞水肿，未见坏死肝细胞（图 2A）。肝癌模型组大鼠肝细胞呈多角形，异型性明显，胞浆丰富，嗜酸性，核大，圆形有清楚的核仁。分化差异癌细胞异型性明显，常有巨核及多核瘤细胞。癌细胞排列成条索状、巢状或呈腺管样，周围有血管内皮包绕（图 2 B）。
新疆医科大学硕士学位论文 肝癌模型组织中 Piwil2、Piwil4、Mael 和 Ddx4 mRNA化扩增曲线中（图 4A、C、E、G、I）可见所有样品均已进入平台期，说明。溶解曲线中（图 4B、D、F、H、J）可见都是单峰，未见杂峰，扩增产基因所选的荧光定量 PCR 引物具有特异性。结果用 2-△△Ct表示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas9系统敲除TET2基因对HepG2细胞增殖和凋亡的影响[J]. 于声,杨玲凤,兰可,谢汶志,岑海燕,姜伯劲,段斯亮. 基因组学与应用生物学. 2018(06)
[2]敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建[J]. 黄晏军,郑艺,汤长宁,刘金河,刘杰麟. 贵州医科大学学报. 2018(05)
[3]非编码RNA与肿瘤发生发展的关系[J]. 李萍,谢小兵. 中华检验医学杂志. 2018 (03)
[4]NPAS2基因敲除的HepG2细胞系构建及其对肝癌细胞凋亡的影响[J]. 李波,刘峰舟,刘明莉,李嘉琦,杨懿,宋子煜,张洪新,牟佼. 现代生物医学进展. 2017(29)
[5]PIWI/piRNA的生物学功能及在肿瘤中的作用[J]. 刘啸白,马珺,薛一雪,刘丽波,郑健,李志清,刘云会. 解剖科学进展. 2017(04)
[6]肝癌相关差异表达基因的生物信息学分析[J]. 白文萱,高健,钱程,张献全. 中华肝脏病杂志. 2017 (06)
[7]Piwi-interacting RNA在肿瘤中的研究进展[J]. 丁梦婷,张蒙,蔡志明. 肿瘤防治研究. 2016(09)
[8]piRNA/PIWI在肝癌发生发展中的机制研究进展[J]. 周代兵,张凌云,许国雄. 肝脏. 2016(08)
[9]DDX4（VASA）在卵巢癌中的表达及其临床意义[J]. 徐景波,朱安颖,孙子茜,王娟娟,邱浩,洪承皎,徐岚,陈友国. 南通大学学报(医学版). 2016(04)
[10]piRNA的功能研究进展[J]. 崔东亚,王佳佳,何顺民. 生理科学进展. 2016(03)
博士论文
[1]DDX46基因在食管鳞癌中的表达及其与食管鳞癌相关性研究[D]. 李斌.兰州大学 2016
硕士论文
[1]癌—睾丸抗原MAEL在结直肠癌中的表达及其临床意义[D]. 杨扬.湖南师范大学 2016
[2]下调MAEL和上调CDH1基因表达抑制肝癌HepG2细胞的迁移和增殖研究[D]. 芦庭秀.青岛大学 2015
[3]沉默Piwil2增强子宫颈癌细胞对顺铂敏感性的机制研究[D]. 程敏.安徽医科大学 2013
[4]MAEL基因在乳腺癌中的表达及相互作用蛋白的筛选[D]. 周求知.湖南师范大学 2011
[5]PIWIL4基因对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响及其机制研究[D]. 苏畅.天津医科大学 2010
本文编号：3648541
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