乳酸乳球菌乳酸亚种IMAU11823胞外多糖结构及eps基因簇转录分析

发布时间：2022-04-27 22:50

　　乳酸乳球菌广泛应用于发酵乳制品,其中一些菌株具有产胞外多糖（Exopolysaccharides,EPS）的特性。乳酸菌EPS结构多变,生物合成复杂,为了解析新的乳酸菌EPS结构特征,探究其生物合成机制,本论文以分离自锡林郭勒盟嚼口的一株具有产EPS的乳酸乳球菌乳酸亚种IMAU11823为研究对象,对其产生的EPS进行分离纯化、初级结构解析,完成菌株全基因组测序和菌株不同生长阶段eps基因簇转录分析等。主要研究结果如下:1.菌株IMAU11823以2%的接种量接种于M17液体培养基,37℃培养24 h后粗多糖得率为201.44 mg/L;该粗多糖具有较强的还原能力和DPPH自由基、羟基自由基清除能力,且具有浓度依赖性。利用DEAE-52阴离子交换柱对获得的粗多糖进行分离纯化得到三个组分,分别命名为EPS-1、EPS-2 和 EPS-3。2.进一步对EPS-1和EPS-2的结构特征进行研究,结果表明EPS-1由甘露糖和葡萄糖组成,摩尔比为1:7.01;EPS-2由甘露糖、鼠李糖和葡萄糖组成,摩尔比为7.45:1:2.34。红外光谱分析结果表明,两者均具有多糖的特征吸收峰,且都含有吡喃糖苷... 

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 引言
    1.1 多糖概述
    1.2 乳酸菌胞外多糖概述
        1.2.1 乳酸菌
        1.2.2 乳酸菌胞外多糖
        1.2.3 胞外多糖在食品行业的应用
        1.2.4 胞外多糖的生物活性
    1.3 胞外多糖结构的鉴定方法
        1.3.1 胞外多糖的分离纯化
        1.3.2 胞外多糖初级结构分析方法
    1.4 乳酸菌胞外多糖生物合成及其基因簇
        1.4.1 胞外多糖的生物合成
        1.4.2 乳酸菌的eps基因簇
    1.5 乳酸乳球菌胞外多糖概述
        1.5.1 乳酸乳球菌
        1.5.2 乳酸乳球菌胞外多糖研究进展
        1.5.3 乳酸乳球菌的eps基因簇
    1.6 立题意义与研究内容
        1.6.1 立题意义
        1.6.2 研究内容
2 实验材料
    2.1 实验菌株
    2.2 试剂与仪器
        2.2.1 材料与试剂
        2.2.2 仪器与设备
3 实验方法
    3.1 胞外多糖的结构特征鉴定
        3.1.1 乳酸乳球菌乳酸亚种IMAU11823胞外多糖的制备
        3.1.2 粗多糖体外抗氧化特性的测定
        3.1.3 乳酸乳球菌乳酸亚种IMAU11823粗多糖的纯化
        3.1.4 单糖组成分析
        3.1.5 红外光谱分析
        3.1.6 核磁共振波谱
    3.2 全基因组测序及eps基因簇鉴定
        3.2.1 菌株培养与基因组DNA的提取
        3.2.2 全基因组测序和组装
        3.2.3 基因组注释
        3.2.4 基因组比较分析
        3.2.5 核酸序列登录号
    3.3 关键基因的微滴式数字PCR定量分析
        3.3.1 RNA的提取
        3.3.2 cDNA的合成
        3.3.3 关键基因的微滴式数字PCR
4 结果与分析
    4.1 胞外多糖含量及体外抗氧化特性的测定
        4.1.1 胞外多糖含量测定结果
        4.1.2 粗多糖体外抗氧化活性
    4.2 胞外多糖结构测定与解析
        4.2.1 胞外多糖的分离纯化
        4.2.2 胞外多糖的单糖组成
        4.2.3 胞外多糖的红外光谱分析
        4.2.4 胞外多糖的核磁共振波谱分析
    4.3 乳酸乳球菌乳酸亚种IMAU11823全基因组测序及eps基因簇鉴定
        4.3.1 乳酸乳球菌乳酸亚种IMAU11823的基因组特征
        4.3.2 乳酸乳球菌乳酸亚种IMAU11823功能注释
        4.3.3 乳酸乳球菌乳酸亚种基因组的比较分析
        4.3.4 糖代谢相关基因的分析
        4.3.5 胞外多糖生物合成基因簇的鉴定
        4.3.6 关键基因表达量的分析
5 结论
致谢
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]自然发酵乳制品中乳酸菌的生物多样性[J]. 张和平.  生命科学. 2015(07)
[2]1株高产EPS嗜热链球菌的筛选及培养条件优化[J]. 刘丽波,李春,孟祥晨.  中国食品学报. 2007(03)

博士论文
[1]德氏乳杆菌保加利亚亚种的群体遗传学和功能基因组学研究[D]. 宋宇琴.内蒙古农业大学 2018

硕士论文
[1]瑞士乳杆菌MB2-1胞外多糖制备、结构和生理功能的研究[D]. 纪鹃.南京农业大学 2014
[2]马奶酒样乳杆菌ZW3（CGMCC2809）WANG1297基因的克隆、表达与功能研究[D]. 西艳双.天津科技大学 2014



本文编号：3649300