达氏鲟dmc1和ly75基因的cDNA克隆及在精子生成中的表达分析

发布时间：2022-07-07 11:00

　　达氏鲟（Acipenser dabryanus）是我国特有的一种淡水定居性珍稀鱼类。早期达氏鲟曾是长江上游重要的经济鱼类之一,20世纪后期由于过度捕捞、水利工程兴建、航道整治、挖沙活动等原因,达氏鲟生存环境遭到严重破坏,物种处于极度濒危状况,已于1988年被列为国家一级保护动物。因此,其物种保护、资源增殖的研究亟待加强,尤其在繁殖生物学方面的研究更是亟需关注。经过十多年的发展,鱼类生殖细胞移植技术已成功应用到多种鱼类,在种质资源保存、增殖放流和物种恢复方面具有重大的应用潜力。近年来有关达氏鲟精原细胞移植的研究已取得阶段性成果,但高效的移植依赖于精原干细胞的体外增殖培养。前期我们已开展了达氏鲟精原细胞培养方面的工作,但对培养的达氏鲟精原干细胞鉴定还有所欠缺。目前,已鉴定的达氏鲟生殖细胞标记基因有dnd和vasa,但是它们除了在精原细胞表达外,在精母细胞中也有表达,因此,有必要鉴定在特异类型生殖细胞表达的基因,进而为体外培养精原干细胞的鉴定奠定基础。本研究鉴定了两个生殖细胞特异表达的基因:dmc1和ly75,通过RT-PCR技术分别克隆得到达氏鲟dmc1和ly75基因的编码区序列,运用生物... 

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 达氏鲟研究进展
        1.1.1 生物学特征及生活习性
        1.1.2 地理分布和资源现状
        1.1.3 研究现状
    1.2 达氏鲟性腺的发育及繁殖生物学
    1.3 生殖细胞
        1.3.1 鱼类生殖细胞的基本特征
        1.3.2 生殖细胞的鉴定
        1.3.3 鱼类生殖细胞的标记基因
    1.4 dmc1基因研究进展
        1.4.1 Dmc1结构特征
        1.4.2 dmc1基因的表达和功能
    1.5 ly75基因研究进展
        1.5.1 Ly75结构和序列特征
        1.5.2 ly75基因的表达特征研究
        1.5.3 Ly75的功能研究
    1.6 本研究的目的及意义
第2章 达氏鲟dmc1基因的cDNA克隆及在精子生成中的表达分析
    前言
    2.1 材料和方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 试剂盒与主要试剂
        2.1.4 总RNA提取步骤
        2.1.5 cDNA模板制备
        2.1.6 达氏鲟dmc1基因编码区克隆
        2.1.7 PCR产物电泳检测、回收及纯化
        2.1.8 连接和转化
        2.1.9 菌落PCR及测序
        2.1.10 达氏鲟dmc1基因序列特征分析和系统进化树构建
        2.1.11 达氏鲟dmc1基因的组织表达特性分析
        2.1.12 石蜡切片和HE染色
        2.1.13 达氏鲟dmc1基因在不同发育时期精巢中的表达分析
        2.1.14 原位杂交
    2.2 结果
        2.2.1 达氏鲟dmc1基因编码区全长克隆
        2.2.2 达氏鲟dmc1基因的生物信息学分析
        2.2.3 达氏鲟dmc1基因的组织表达特征
        2.2.4 达氏鲟精巢组织的发育
        2.2.5 达氏鲟dmc1基因real-timePCR标准曲线的建立
        2.2.6 达氏鲟dmc1mRNA在不同发育时期精巢中的表达水平
        2.2.7 达氏鲟dmc1mRNA在精巢中的定位
    2.3 讨论
第3章 达氏鲟ly75基因cDNA克隆与组织表达特性研究
    前言
    3.1 材料和方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 总RNA的提取步骤
        3.1.5 cDNA模板制备
        3.1.6 达氏鲟ly75基因部分cDNA序列获得
        3.1.7 PCR产物电泳检测及纯化
        3.1.8 连接和转化
        3.1.9 菌落PCR及测序
        3.1.10 达氏鲟ly75基因序列特征分析和系统进化树构建
        3.1.11 qRT-PCR分析
        3.1.12 石蜡切片原位杂交
    3.2 结果
        3.2.1 达氏鲟ly75基因cDNA序列特征分析
        3.2.2 达氏鲟ly75基因同源性分析
        3.2.3 达氏鲟ly75基因组织表达分析
        3.2.4 达氏鲟ly75基因real-timePCR标准曲线的建立
        3.2.5 达氏鲟ly75基因在不同发育时期精巢的表达分析
        3.2.6 达氏鲟ly75基因mRNA在精巢中的定位
    3.3 讨论
第4章 总结
参考文献
附录Ⅰ 发表的论文
附录Ⅱ 参加的课题
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]尼罗罗非鱼Ly75基因的克隆、原核表达和多克隆抗体制备[J]. 陈琼,曹建萌,卢迈新,胡欣欣,陈昆平,郭富强.  生物技术. 2017(03)
[2]达氏鲟gdf11基因cDNA的克隆及组织表达特征分析[J]. 杜浩,冷小茜,张书环,叶欢,沈丽,刘志刚,陈细华,危起伟.  淡水渔业. 2017(01)
[3]为达氏鲟重建家园[J]. 杜浩,危起伟.  大自然. 2016(06)
[4]精子发生减数分裂过程中相关基因的研究进展[J]. 马海涛,牛长敏,郭佳倩,郑英.  生殖医学杂志. 2016(09)
[5]基于dnd基因标记的大黄鱼原始生殖细胞发生发育的初步研究[J]. 陈仕海,蔡明夷,张子平,韩坤煌,姜永华,张伟军,王艺磊.  水产学报. 2015(09)
[6]达氏鲟生长激素基因cDNA克隆、表达及免疫荧光定位研究[J]. 单喜双,岳华梅,陈细华,叶欢,杨晓鸽,李创举.  水生生物学报. 2015(02)
[7]达氏鲟视网膜早期发育及其相关机能[J]. 史玲玲,危起伟,柴毅,杜浩,李罗新,谢晓.  中国水产科学. 2013(05)
[8]达氏鲟全人工繁殖技术研究[J]. 龚全,刘亚,杜军,赵刚,陈先均,李军,李强,李禾,凡磊.  西南农业学报. 2013(04)
[9]达氏鲟的资源现状及研究进展[J]. 鲁雪报,倪勇,饶军,唐大明.  水产科技情报. 2012(05)
[10]牦牛和犏牛Dmc1基因序列分析及睾丸组织转录水平研究[J]. 李贤,李齐发,赵兴波,徐洪涛,顾垚,朱翔,谢庄,刘红林.  中国农业科学. 2010(15)

硕士论文
[1]达氏鲟微卫星分离及其亲子鉴定研究[D]. 骆慧.华中农业大学 2013



本文编号：3656302