TGF-β及其Ⅰ型受体在三角帆蚌免疫应答和创伤修复中的作用

发布时间：2022-07-13 10:27

　　三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）是我国重要的淡水养殖贝类之一,TGF-β介导的信号通路在胚胎发育、组织和器官的形成、创伤修复及免疫应答调节等方面发挥重要的作用。本研究克隆了三角帆蚌的TGF-β及其I型受体（TGF-βRI）基因的cDNA全长序列。结果表明:三角帆蚌TGF-β基因cDNA序列全长2850bp,其中5’非编码区（UTR）长度为211bp;3’UTR为1457bp;开放阅读框（ORF）为1182bp,编码393个氨基酸。预测的TGF-β蛋白包含1个25aa的信号肽,1个TGF-β结构域（294-393）。TGF-βRI基因的cDNA全长序列为2017bp,其中5’UTR为80bp;3’UTR为383bp;ORF长度为1554bp,编码517个氨基酸。预测的TGF-βRI蛋白包含信号肽（1-22aa）,膜外区（23-127aa）、跨膜区（128-150aa）以及胞内区（151-517）。胞内区含有TGF-β受体特征序列GS结构域和丝氨酸/苏氨酸激酶催化结构域。序列比对分析显示:三角帆蚌TGF-β与哺乳动物TGF-β1同源性为25%。预测的TGF-β成熟蛋白由18... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
缩略语表
第1章 引言
    1.1 TGF-β信号通路
        1.1.1 TGF-β亚家族
        1.1.2 TGF-β受体
        1.1.3 TGF-β信号的功能
        1.1.4 TGF-β信号的调节
        1.1.5 TGF-β信号在免疫中的作用
        1.1.6 TGF-β信号在组织损伤修复中的作用
    1.2 本研究的目的和意义
第2章 三角帆蚌TGF-β及其I型受体基因克隆、原核表达及在创伤修复中的作用
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 菌种和ccc DNA
        2.2.3 实验仪器
        2.2.4 实验试剂
        2.2.5 引物表
        2.2.6 微生物刺激及创伤修复试验和抑制阻断实验
        2.2.7 总RNA的提取
        2.2.8 SMART c DNA的合成
        2.2.9 Hc TGF-β和TGF-βRI基因的克隆
        2.2.10 TGF-β基因和TGF-βRI基因的生物学分析
        2.2.11 TGF-β和TGF-βRI基因的原核表达
        2.2.12 TGF-βRI基因胞内段的原核表达
        2.2.13 TGF-β及TGF-βRI的多克隆抗体制备
        2.2.14 TGF-β及TGF-βRI多克隆抗体效价的ELISA检测
        2.2.15 TGF-β及TGF-βRI Western blotting检测
        2.2.16 重组蛋白TGF-β活性测定
    2.3 实验结果
        2.3.1 三角帆蚌的总RNA
        2.3.2 Hc TGF-β基因的RACE实验和Hc TGF-βRI基因片段克隆
        2.3.3 Hc TGF-β和Hc TGF-βRI基因c DNA全长序列及推导的氨基酸序列
        2.3.4 预测的Hc TGF-β和Hc TGF-βRI蛋白序列的生物信息学分析
        2.3.5 推导Hc TGF-β和Hc TGF-βRI氨基酸序列比对
        2.3.6 TGF-β和TGF-βRI基因的系统进化树
        2.3.7 Hc TGF-βRI基因的组织表达
        2.3.8 嗜水气单胞菌和肽聚糖刺激后Hc TGF-βRI基因在肝胰脏、血细胞组织中的表达
        2.3.9 创面组织TGF-βRI基因的表达变化
        2.3.10 SB431542 处理三角帆蚌后TGF-β/Smads信号通路下游基因表达变化
        2.3.11 TGF-β基因在大肠杆菌中的表达及纯化
        2.3.12 TGF-βRI基因在大肠杆菌中的表达及纯化
        2.3.13 多克隆抗体的制备及ELISA检测
        2.3.14 Western blotting检测
        2.3.15 重组蛋白TGF-β活性测定
    2.4 讨论
第3章 结论与展望
    3.1 结论
    3.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]不同温度胁迫方式对中华绒螯蟹免疫化学指标的影响[J]. 洪美玲,陈立侨,顾顺樟,刘超,张璐,李二超.  应用与环境生物学报. 2007(06)
[2]Construction of prokaryotic expression system of TGF-β1 epitope gene and identification of recombinant fusion protein immunity[J]. Yong-Hong Guo, Jin-Yan Luo, Jun-Hong Wang, The Second Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an710004, Shannxi Province, China Zhi-Ming Hao, The Post Doctor Xijing Hospital of Fourth Military Medical University, Xi’an 710004, Shannxi Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(40)



本文编号：3659873