棘孢木霉菌嗜铁素相关基因sidA的功能研究

发布时间：2022-07-14 12:46

　　铁是真核细胞的一种至关重要的元素,对一些重要的细胞功能如DNA的合成与修复、呼吸作用以及自由基的解毒作用等也是必需的。虽然地壳的含铁量非常丰富,但由于在中性pH的需氧环境中铁的溶解度有限,因而能被生物体直接利用的有效铁含量很低。在长期的进化过程中,某些植物和微生物能够产生一种在低铁的环境中特异性地螯合三价铁离子的小分子有机化合物嗜铁素,将土壤中难溶性的铁转化为生物体可利用的铁。虽然本实验室对胞外嗜铁素在生防、促生等方面做了一些研究,但对其合成的分子机制以及促生机制尚不明确,有待于进一步研究。木霉菌（Trichoderma spp.）是当前绿色农业生产中最具应用潜力的生防微生物之一,能够产生具有吸收、贮存和胞内运输铁的功能以及对菌体本身生长发育有重要作用的嗜铁素。本研究以实验室分离鉴定的高产嗜铁素菌株棘孢木霉菌（Trichoderma asperellum）T6为材料,展开了以下几方面的研究:1、为了明确棘孢木霉菌嗜铁素合成的关键基因,首先,通过棘孢木霉菌野生型菌株（WT）在缺铁培养基连续培养并测定每天的嗜铁素相对含量的实验,发现在第5 d时,嗜铁素相对含量达到最大值37.53%,随后趋... 

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
缩略表
第一章 文献综述
    1.1 铁元素的重要性
    1.2 嗜铁素
        1.2.1 嗜铁素的类型与测定
        1.2.2 真菌嗜铁素的类型与结构
        1.2.3 嗜铁素的潜在应用
    1.3 嗜铁素合成相关基因及其研究进展
        1.3.1 嗜铁素合成的相关基因
        1.3.2 嗜铁素合成相关基因研究进展
    1.4 DOUBLE-JOINTPCR技术原理及应用
    1.5 本研究的立题依据、研究内容及技术路线
        1.5.1 立题依据
        1.5.2 研究内容
        1.5.3 技术路线
第二章 棘孢木霉菌T6嗜铁素相关基因SIDA
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料
            2.1.1.1 供试菌株
            2.1.1.2 工具酶和主要试剂
            2.1.1.3 培养基
            2.1.1.4 主要溶液配方
            2.1.1.5 主要仪器设备
        2.1.2 实验方法
            2.1.2.1 嗜铁素定量测定
            2.1.2.2 棘孢木霉菌sidA基因的预测和生物信息学分析
            2.1.2.3 棘孢木霉菌T6的培养和保存
            2.1.2.4 棘孢木霉菌T6孢子悬液的制备
            2.1.2.5 棘孢木霉T6发酵液中单位质量嗜铁素相对含量的测定
            2.1.2.6 嗜铁素合成基因sidA的RT-PCR测定
    2.2 结果与分析
        2.2.1 嗜铁素定量测定
        2.2.2 棘孢木霉菌SIDA基因的预测分析
        2.2.3 棘孢木霉T6发酵液中单位质量嗜铁素相对含量的测定
        2.2.4 嗜铁素合成基因SIDA的RT-PCR测定
    2.3 讨论
第三章 嗜铁素合成相关基因SIDA的基因敲除
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料
            3.1.1.1 供试菌株和载体
            3.1.1.2 工具酶和主要试剂
            3.1.1.3 培养基
            3.1.1.4 主要溶液和缓冲液配制
            3.1.1.5 主要仪器设备
            3.1.1.6 PCR引物
        3.1.2 实验方法
            3.1.2.1 棘孢木霉菌T6对潮霉素B敏感性测定
            3.1.2.2 构建敲除载体
            3.1.2.3 棘孢木霉菌sidA基因敲除
    3.2 结果与分析
        3.2.1 棘孢木霉菌T6对潮霉素B敏感性测定
        3.2.2 突变体的PCR验证
        3.2.3 突变体的SOUTHERN验证
    3.3 讨论
第四章 棘孢木霉菌SIDA基因敲除突变体表型分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料
            4.1.1.1 供试菌株
            4.1.1.2 培养基
            4.1.1.3 主要仪器设备
        4.1.2 实验方法
            4.1.2.1 野生型与突变体嗜铁素差异
            4.1.2.2 菌落生长速度测定
            4.1.2.3 产孢量与孢子萌发测定
            4.1.2.4 胁迫敏感性测定
    4.2 结果与分析
        4.2.1 野生型与突变体嗜铁素差异
        4.2.2 菌落生长速度测定
        4.2.3 产孢量与孢子萌发测定
            4.2.3.1 产孢量测定
            4.2.3.2 孢子萌发测定
        4.2.4 胁迫敏感性测定
    4.3 讨论
全文总结
参考文献
致谢



本文编号：3661149