扁蓿豆MrDREB1转录因子调控下游基因的鉴定及其作用机制的初步研究

发布时间：2022-07-27 17:00

　　在复杂的逆境胁迫环境中,DREB（Dehydration Responsive Element Binding Protein）类转录因子发挥重要作用,目前的研究大多集中在对其功能的分析研究,而对其调控机制少见报道。DREB结合蛋白中第14位氨基酸（缬氨酸V）和第19位氨基酸（谷氨酸E）对于结合DRE/CRT元件非常关键,已有研究表明外源MrDREB1基因可以调控下游逆境胁迫应答基因MrCAS15A的表达,因此,预测MrDREB1通过与MrCAS15A启动子区域的DRE/CRT元件直接结合,调控其表达。本研究主要取得结果如下:1.提取生长4周的幼苗基因组DNA（Deoxyribonucleic Acid）,通过PCR克隆得到大小为1266 bp的MrCAS15A的DNA序列,再利用扩增得到的基因组序列信息,运用Genome Walking技术扩增获得1968 bp MrCAS15A启动子片段。Plant CARE预测分析结果显示,该启动子序列中含有多个抗逆相关的功能元件,其中DRE元件（ATGTCGGTA）位于-（1643-1651）bp,该启动子中还包含与脱落酸、水杨酸等激素响应相关... 

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词表Abbreviations
一 引言
    1.1 扁蓿豆简介
    1.2 植物启动子概述
        1.2.1 启动子的结构
        1.2.2 启动子的类型
        1.2.3 启动子克隆方法
        1.2.4 启动子功能研究方法
    1.3 转录因子作用机制及研究进展
        1.3.1 转录因子与DNA互作的研究进展
        1.3.2 转录因子与DNA互作研究方法
        1.3.3 DREB转录因子作用机制
        1.3.4 受DREB调控的下游基因
    1.4 本研究目的与意义
二 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌种与菌株
        2.1.3 常用试剂与试剂盒
        2.1.4 引物序列
    2.2 实验方法
        2.2.1 MrCAS15A启动子的克隆
        2.2.2 酵母单杂交实验
        2.2.3 扁蓿豆MrDREB1 下游抗逆基因的鉴定
三 结果与分析
    3.1 MrCAS15A启动子的克隆和序列分析
        3.1.1 扁蓿豆基因组DNA的提取
        3.1.2 MrCAS15A DNA序列的内含子预测
        3.1.3 PCR克隆MrCAS15A DNA序列
        3.1.4 MrCAS15A DNA序列测序比对结果
        3.1.5 MrCAS15A启动子克隆
        3.1.6 MrCAS15A的启动子的生物信息学分析
    3.2 酵母单杂交实验
        3.2.1 酵母表达载体pAbAi-3×DRE/3×DRE mutant的构建
        3.2.2 pAbAi-3×DRE/3×DRE mutant酵母诱饵菌株的获得
        3.2.3 假阳性检测
        3.2.4 酵母表达载体pGADT7 AD-MrDREB1 的构建
        3.2.5 pGADT7-MrDREB1-pAbAi-3×DRE/3×DRE mutant酵母菌株的获得
        3.2.6 DRE元件与MrDREB1 蛋白互作
    3.3 转基因扁蓿豆MrDREB1 的功能验证
        3.3.1 扁蓿豆转基因根部的荧光检测
        3.3.2 逆境胁迫下转基因扁蓿豆的根部表型统计
        3.3.3 扁蓿豆转基因根部的生理生化指标检测
        3.3.4 扁蓿豆RNA的提取
        3.3.5 qRT-PCR
四 结论与讨论
    4.1 讨论
    4.2 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]启动子的类型及应用[J]. 贺飞燕,闫建俊,白云凤,冯瑞云,施俊凤.  山西农业科学. 2017(01)
[2]牡丹抗逆转录因子基因PsDREB的功能解析[J]. 刘慧春,马广莹,朱开元,邹清成,周江华,田丹青.  浙江大学学报(农业与生命科学版). 2016(06)
[3]荔枝古树胚性愈伤组织LcCu/Zn-SOD3基因启动子的克隆及功能验证[J]. 练从龙,卢秉国,赖钟雄,冯新,林玉玲,陈裕坤,张梓浩.  西北植物学报. 2015(01)
[4]植物逆境胁迫耐受性启动子的研究进展[J]. 张晶红,那杰.  植物生理学报. 2014(06)
[5]内蒙古扁蓿豆叶片解剖性状与抗旱性的研究[J]. 李鸿雁,李志勇,师文贵,蔡丽艳,刘磊.  草业学报. 2012(03)
[6]内蒙古扁蓿豆野生资源形态特征研究[J]. 韩海波,师文贵,王晓娜,李志勇,李鸿雁,李兴酉,刘磊.  植物遗传资源学报. 2011(05)
[7]植物诱导型启动子的研究进展[J]. 王志新,赵琳,李文滨.  大豆科技. 2011(03)
[8]扁蓿豆的抗性研究进展[J]. 韩海波,师文贵,李志勇,李鸿雁,李兴酉,刘磊,王晓娜.  草业科学. 2011(04)
[9]植物组织特异性启动子的研究进展[J]. 糜赛男,曹明富.  生物学教学. 2010(07)
[10]藻类基因启动子结构与功能研究进展[J]. 张学成,郭楠,宋晓金.  中国海洋大学学报(自然科学版). 2008(03)

博士论文
[1]扁蓿豆抗寒相关基因的克隆与表达分析[D]. 张宇.内蒙古农业大学 2013
[2]大豆、小麦抗逆相关Gm/TaAREB转录因子基因、启动子克隆及功能鉴定[D]. 高世庆.中国农业科学院 2007

硕士论文
[1]陆地棉GhMBF1c基因及其启动子的克隆与分析[D]. 杨召恩.中国农业科学院 2013
[2]基于芯片数据的水稻非生物逆境相关基因筛选及其启动子分析[D]. 李嘉平.湖南农业大学 2012
[3]水稻种胚特异基因OsESG1及其启动子的研究[D]. 房孝良.山东师范大学 2012
[4]枳根特异性contig2基因及启动子的克隆与分析[D]. 李凤龙.西南大学 2012
[5]一种启动子探针载体的构建及低温诱导启动子的研究[D]. 沈林丽.南京理工大学 2010



本文编号：3665835