CiPP2C37-like基因叶片瞬时表达提高中间锦鸡儿耐旱、耐盐能力及其转基因蒺藜苜蓿的获得

发布时间：2022-08-09 13:50

　　自然界中生长的植物,经常会遭遇干旱、寒冷、盐碱等非生物胁迫,严重影响植物的生长、发育和产量。植物在长期与环境相互适应的过程中形成了稳定的胁迫调节系统,蛋白磷酸化与去磷酸化便是调节生物生命活动的重要系统。已有的研究表明,PP2C作为一种重要的蛋白磷酸酶参与植物的胁迫响应。本研究基于之前对拟南芥异源表达CiPP2C37-like基因和中间锦鸡儿叶片瞬时表达系统建立的研究基础上,通过瞬时表达系统验证了CiPP2C37-like基因在耐旱和耐盐方面的功能,并尝试建立与中间锦鸡儿同属于豆科的模式植物蒺藜苜蓿的稳定遗传转化体系,主要研究结果如下:1.利用刘坤博士建立的体系,在叶片中瞬时表达CiPP2C37-like基因增强了中间锦鸡儿幼苗耐旱、耐盐的能力,表明该基因可作为牧草、作物等抗性育种的候选基因。2.以蒺藜苜蓿生态型R108叶片为外植体,首先尝试进行了GUS报告基因的遗传转化,并通过组织化学染色证明获得了表达GUS报告基因的蒺藜苜蓿不定芽。3.在进行CiPP2C37-like基因转化过程中,进一步对蒺藜苜蓿无菌苗叶片、根段、叶柄为外植体进行愈伤诱导、丛芽诱导的比较和筛选,最终确定叶片较根段、... 

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表
1 引言
    1.1 瞬时表达研究进展
        1.1.1 稳定遗传转化体系与瞬时表达体系
        1.1.2 介导植物瞬时表达常用方法
        1.1.3 豆科植物瞬时表达研究进展
    1.2 蒺藜苜蓿遗传转化研究进展
        1.2.1 转化的理论依据
        1.2.2 转化方法
            1.2.2.1 根癌农杆菌介导的转化
            1.2.2.2 发根农杆菌介导的转化
        1.2.3 影响转化效率的因素
            1.2.3.1 生态型对遗传转化的影响
            1.2.3.2 外植体对遗传转化的影响
            1.2.3.3 菌株类型
            1.2.3.4 培养基类型
            1.2.3.5 激素调控
        1.2.4 褐化预防
    1.3 PP2C研究现状
    1.4 研究目的及意义
    1.5 技术路线
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及载体
        2.1.3 实验试剂
            2.1.3.1 主要试剂以及药品
            2.1.3.2 试剂配制
            2.1.3.3 培养基配制
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 基于中间锦鸡儿瞬时表达体系分析CiPP2C37-like功能
            2.2.1.1 植物的培养
            2.2.1.2 农杆菌GV3101感受态细胞的制备
            2.2.1.3 电转化农杆菌感受态细胞
            2.2.1.4 中间锦鸡儿瞬时表达农杆菌菌悬液的制备
            2.2.1.5 注射法侵染中间锦鸡儿叶片
            2.2.1.6 瞬时表达CiPP2C37-like中间锦鸡儿抗旱性检测
            2.2.1.7 瞬时表达CiPP2C37-like中间锦鸡儿耐盐性检测
        2.2.2 蒺藜苜蓿遗传转化体系建立
            2.2.2.1 外植体培养方法
            2.2.2.2 电转化EHA105农杆菌感受态细胞
            2.2.2.3 农杆菌介导的GUS转化流程
            2.2.2.4 农杆菌介导的CiPP2C37-like转化流程
3 结果与分析
    3.1 叶片瞬时表达CiPP2C37-like基因的中间锦鸡儿幼苗抗逆性分析
        3.1.1 瞬时表达CiPP2C37-like基因的中间锦鸡儿幼苗抗旱能力增强
        3.1.2 瞬时表达CiPP2C37-like基因的中间锦鸡儿幼苗耐盐能力提高
    3.2 过表达CiPP2C37-like基因蒺藜苜蓿遗传转化体系的建立
        3.2.1 农杆菌介导的GUS报告基因的遗传转化
            3.2.1.1 外植体材料的选取
            3.2.1.2 愈伤组织的诱导
            3.2.1.3 不定芽的诱导
            3.2.1.4 生根培养
            3.2.1.5 组织化学染色法检测GUS转基因蒺藜苜蓿幼苗
        3.2.2 农杆菌介导的CiPP2C37-like基因转化蒺藜苜蓿
            3.2.2.1 外植体材料的选取
            3.2.2.2 愈伤组织的诱导
            3.2.2.3 不定芽的诱导
            3.2.2.4 生根培养
            3.2.2.5 转CiPP2C37-like基因植株鉴定结果
4 讨论
    4.1 外植体的选取
    4.2 愈伤诱导
    4.3 不定芽分化
    4.4 生根诱导
    4.5 中间锦鸡儿叶片瞬时表达CiPP2C37-like基因抗逆性分析
5 结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3672673