白桦BpEIN3基因启动子克隆与表达特性

发布时间：2022-08-12 17:05

　　EIN3基因是乙烯信号转导中重要的转录因子,在植物的衰老中发挥重要的作用。为研究EIN3基因在白桦中的表达特性,通过PCR方法克隆了2 843 bp白桦BpEIN3基因的启动子区域片段,构建了pBpEIN3::CUS表达载体进行白桦转基因,获得1株pBpEIN3::CUS白桦株系;并利用PLANCE在线软件对BpEIN3基因启动子片段的主要顺式作用元件进行的分析预测;同时分别用ET、IAA、MeJA、SA和GA处理转pBpEIN3::GUS白桦株系,通过实时定量PCR及GUS活性的检测分析该启动子的表达调控模式。结果表明,BpEIN3启动子包含着多种功能的调控顺式元件;且pBpEIN3::GUS对不同激素均有不同程度的响应,其中SA、GA响应最为明显,说明不同激素对BpEIN3基因的表达模式产生了影响。综上表明:所克隆的BpEIN3基因上游2 843 bp的DNA片段具有启动子活性,且能驱动报告基因的有效表达,为后续基因功能的研究奠定基础。 

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 植物材料
    1.2 主要试剂与载体
    1.3 BpEIN3启动子序列分析及克隆
    1.4 植物表达载体构建及遗传转化
    1.5 pBpEIN3::GUS的白桦分子检测
    1.6 pBpEIN3::GUS转基因白桦不同激素处理下GUS基因的相对表达
    1.7 不同激素处理下pBpEIN3::GUS株系GUS活性测定
2 结果与分析
    2.1 BpEIN3启动子序列分析
    2.2 BpEIN3启动子克隆及pBpEIN3::GUS重组载体的获得
    2.3 转pBpEIN3::GUS白桦株系的获得
    2.4 不同激素处理后pEIN3::GUS株系GUS表达量分析
    2.5 不同激素处理后pEIN3::GUS株系GUS活性分析
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]水稻类病斑早衰突变体lmps1的表型鉴定与基因定位[J]. 夏赛赛,崔玉,李凤菲,谭佳,谢园华,桑贤春,凌英华.  作物学报. 2019(01)
[2]中华猕猴桃EIN3/EIL转录因子家族的成员鉴定、系统进化和基因表达模式[J]. 陈强,刘建,陈丹阳,于丰源,江梦柯,郑玉凤,牛向丽,刘永胜,黄胜雄.  应用与环境生物学报. 2018(02)
[3]大豆GmWRI1a基因启动子克隆及序列分析[J]. 闫丽,杨强,邵宇鹏,李丹丹,王志坤,李文滨.  作物杂志. 2017(02)
[4]水稻类病斑及早衰突变体lms1的鉴定及基因初步定位[J]. 林艳,陈在杰,田大刚,杨广阔,杨绍华,刘华清,陈松彪,王锋.  福建农业学报. 2014(01)
[5]Ectopic expression of foxtail millet zip-like gene,SiPf40,in transgenic rice plants causes a pleiotropic phenotype affecting tillering,vascular distribution and root development[J]. LUAN YunXia1,2,WANG BaoSheng1,ZHAO Qian1,AO GuangMing1 ＆ YU JingJuan1* 1State Key Laboratory for Agrobiotechnology,College of Biological Sciences,China Agricultural University,Beijing 100193,China;2National Engineering Research Center for Information Technology in Agriculture,Beijing 100097,China.  Science China（Life Sciences）. 2010(12)
[6]水稻TWH1基因启动子的克隆及表达分析[J]. 查中萍,李进波,万丙良,戚华雄.  湖北农业科学. 2010(10)
[7]赤霉素处理对采后柿果实乙烯生物合成的影响[J]. 黄森,张继澍,张院民.  中国农学通报. 2006(03)

硕士论文
[1]丹参EIL类转录因子EIN3基因的克隆与功能分析[D]. 王宇.上海师范大学 2018



本文编号：3676264