浒苔中谷胱甘肽转移酶家族的功能研究

发布时间：2022-09-17 10:42

　　从2007年以来,黄海绿潮已经连续爆发了十二年,对海洋生态环境和沿岸居民生活造成了极大的危害和经济损失。研究表明,石莼属的浒苔是黄海绿潮优势种。优势种通过表现出对广泛的辐照度、温度和盐度的明显适应性,或对各种环境条件的生理适应性,从而获得竞争优势。植物抗氧化系统的特征之一就是通过提高自身对环境的耐受性从而表现出广温、广盐等生长特征。浒苔具有广温、广盐的生长特征,因此,我们从植物抗氧化胁迫方面入手,选取了抗氧化系统重要成员谷胱甘肽转移酶（GST）。通过研究谷胱甘肽转移酶在浒苔中的表达情况以确定浒苔中的谷胱甘肽转移酶是否参与抗氧化胁迫从而提高浒苔对逆境环境的耐受性。谷胱甘肽转移酶是一类在生物体中广泛存在的蛋白质超家族,在解毒抗逆方面具有重要作用,但是之前有关GST的研究主要集中在动物和高等植物,藻类中的研究较少,有关浒苔中GST的研究还未见报道。本研究以浒苔为研究对象,在获得GST基因序列后,通过对基因和蛋白序列进行生物信息学分析,对蛋白进行表达纯化和酶活测定等方法,对浒苔GST基因家族进行了分子进化、基因表达和蛋白功能分析,获得了如下结果:1.浒苔GST基因克隆:通过基因克隆我们得到了 ... 

【文章页数】：101 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
符号说明及缩略词
第一章 绪论
    1.1 黄海绿潮
    1.2 浒苔
        1.2.1 浒苔的进化地位
        1.2.2 浒苔形态特征
        1.2.3 浒苔繁殖方式
    1.3 谷胱甘肽转移酶
        1.3.1 GST分类
        1.3.2 GST的命名
        1.3.3 GST的进化
        1.3.4 植物GST功能
        1.3.5 GST在生物技术领域的应用前景
    1.4 本研究的目的和意义
第二章 浒苔GST基因的克隆分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验样品
        2.1.2 培养基
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 总RNA的提取
        2.2.2 RNA反转录为cDNA
        2.2.3 浒苔GST基因克隆
        2.2.4 GST生物信息学分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 浒苔GST目的片段的扩增
        2.3.2 浒苔GST基因的生物信息学分析
    2.4 讨论
第三章 浒苔GST蛋白的功能研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌种和质粒
        3.1.2 抗生素、生长素
        3.1.3 试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 总RNA的提取
        3.2.2 RNA反转录为cDNA
        3.2.3 重组表达载体的构建
        3.2.4 重组蛋白的原核表达
        3.2.5 重组蛋白的纯化
        3.2.6 纯化后蛋白浓度的测定
        3.2.7 酶活的测定
        3.2.8 浒苔GST基因的定量表达
    3.3 结果与分析
        3.3.1 浒苔GST基因表达载体的构建
        3.3.2 重组蛋白的原核表达
        3.3.3 重组蛋白的纯化
        3.3.4 纯化后蛋白的浓度测定
        3.3.5 酶活的测定
        3.3.6 浒苔GST基因的定量表达
    3.4 讨论
结论
附录
参考文献
致谢
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本文编号：3679081