不同倍性虹鳟原始生殖细胞标记基因的表达及定位研究

发布时间：2022-10-08 18:20

　　虹鳟（Oncorhynchus mykiss）为典型的冷水性鱼类,因肉质鲜美、营养丰富等优点,已成为我国鲑鳟鱼类主要养殖品种。三倍体雌性虹鳟性腺发育异常,不能正常产生配子进行繁殖,这不仅能有效减少卵巢发育阶段所需要的能量损失,还避免了在产卵季节导致的生长停滞、鱼肉质量下降和高死亡率等情况的发生,因此,颇受养殖者青睐,全雌三倍体虹鳟也逐渐成为养殖重点。目前国内外已从多方面对三倍体雌性虹鳟不育的机制进行研究,但还没有从生殖细胞角度进行探索,因此,本研究通过原始生殖细胞（PGCs）标记基因Vasa及Dead end（Dnd）,对不同倍性雌性虹鳟胚胎及性腺分化关键时期进行研究,分析两种基因在二倍体与三倍体雌性虹鳟中的表达量及表达位置变化,从生殖细胞角度探究三倍体雌性虹鳟不育原因,为进一步研究三倍体雌性虹鳟性腺败育机制提供理论基础。主要研究结果如下:1.通过克隆扩增得到虹鳟Dnd基因序列长为1,231 bp,共编码364个氨基酸。氨基酸多重比对显示虹鳟Dnd与大鳞大马哈同源性最高为98.36%,与其他硬骨鱼相似度在97.81-44.4%之间。Dnd在进化上非常保守,系统进化树显示虹鳟Dnd在硬骨... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 虹鳟概述
        1.1.1 虹鳟简介
        1.1.2 虹鳟三倍体人工诱导
    1.2 鱼类原始生殖细胞概述
        1.2.1 鱼类PGCs特征
        1.2.2 鱼类PGCs起源
        1.2.3 鱼类PGCs迁移
        1.2.4 鱼类PGCs可视化
        1.2.5 鱼类PGCs应用
        1.2.6 鱼类PGCs标记基因
    1.3 Vasa基因研究进展
        1.3.1 Vasa基因结构及序列特征
        1.3.2 Vasa基因在鱼类发育过程中的表达
    1.4 Dnd基因研究进展
        1.4.1 Dnd基因结构及作用机制
        1.4.2 Dnd基因功能
        1.4.3 Dnd基因在鱼类发育过程中的表达
    1.5 本研究目的及意义
第2章 虹鳟Dnd基因克隆及序列特征分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要试剂盒及药品
        2.1.4 相关试剂配制
    2.2 引物序列
    2.3 实验方法
        2.3.1 总RNA提取
        2.3.2 RNA反转为cDNA
        2.3.3 PCR扩增基因cDNA片段
        2.3.4 PCR产物纯化及回收
        2.3.5 产物连接转化阳性克隆筛选
        2.3.6 测序
        2.3.7 虹鳟Dnd基因序列分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 虹鳟Dnd基因cDNA克隆
        2.4.2 虹鳟Dnd氨基酸生物信息学分析
        2.4.3 虹鳟Dnd氨基酸序列比对
        2.4.4 系统进化树分析
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
第3章 Vasa及 Dnd基因在不同倍性虹鳟中的表达及定位研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物及采集方法
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 实验试剂及配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 实时荧光定量PCR
        3.2.2 Western blot
        3.2.3 免疫组织化学切片
    3.3 实验结果
        3.3.1 Vasa及 Dnd基因在不同倍性雌性虹鳟成体各组织中表达分析
        3.3.2 Vasa及 Dnd基因在不同倍性虹鳟胚胎发育阶段表达分析
        3.3.3 Vasa及 Dnd基因在不同倍性雌性虹鳟各发育阶段性腺中表达分析
        3.3.4 Vasa及 Dnd蛋白在不同倍性雌性虹鳟各发育阶段性腺中的定位研究
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体介导的三倍体虹鳟卵母细胞凋亡[J]. 韩英,马凯,王彦娜,吕晓楠,董宏伟,张振利,薛淑群.  东北农业大学学报. 2019(12)
[2]鱼类性腺发育研究进展[J]. 刘晨斌,徐革锋,黄天晴,谷伟,张玉勇,相福生,王炳谦.  水产学杂志. 2019(01)
[3]多倍体鲫鲤原始生殖细胞的标记及其迁移研究[J]. 李华金,许文婷,肖亚梅,彭亮跃.  生命科学研究. 2018(06)
[4]Minifish dazl和dnd基因的克隆及表达分析[J]. 陈克让,丁天宜,李名友.  基因组学与应用生物学. 2018(07)
[5]七彩神仙鱼Vasa基因cDNA的克隆及表达分析[J]. 林睿涓,高建忠,金仕容,赵玉明,陈再忠.  上海海洋大学学报. 2017(03)
[6]黑龙江所取得虹鳟全雌三倍体制种工艺核心关键技术新突破[J].   中国水产. 2016(03)
[7]基于dnd基因标记的大黄鱼原始生殖细胞发生发育的初步研究[J]. 陈仕海,蔡明夷,张子平,韩坤煌,姜永华,张伟军,王艺磊.  水产学报. 2015(09)
[8]翘嘴红鲌Vasa基因cDNA克隆及其组织表达特征[J]. 曹访,刘莉,采克俊,李景芬.  中国畜牧杂志. 2014(13)
[9]Vasa基因在斑马鱼不同发育时期的mRNA表达分析[J]. 孙冬捷,王晨,严继舟.  广东农业科学. 2013(13)
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博士论文
[1]牙鲆生殖细胞增殖、分化规律及分子机制的研究[D]. 杨阳.中国科学院大学(中国科学院海洋研究所) 2018
[2]三倍体虹鳟卵巢败育的调控机制研究[D]. 徐革锋.东北农业大学 2016
[3]半滑舌鳎生殖细胞标记基因的克隆、表达及调控区功能验证[D]. 黄进强.中国海洋大学 2014
[4]基于vasa/dnd基因标记的两种海水鱼原始生殖细胞发生发育的研究[D]. 林帆.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2013
[5]不同倍性虹鳟Oncorhynchus mykiss性腺和配子发育及血细胞比较研究[D]. 韩英.东北农业大学 2008

硕士论文
[1]牙鲆dead end 基因功能的初步探究[D]. 隋玉嫘.中国科学院研究生院(海洋研究所) 2016
[2]牙鲆原始生殖细胞的标记及其迁移机制的初步研究[D]. 李美洁.中国科学院研究生院(海洋研究所) 2015
[3]中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）生殖相关基因的克隆及其表达模式研究[D]. 王敏.苏州大学 2015
[4]尼罗罗非鱼dnd和aldhla2基因在生殖细胞发育过程中的功能研究[D]. 方玲玲.西南大学 2014
[5]牙鲆vasa基因的克隆、表达分析及其启动子调控的GFP报告载体构建[D]. 吴晓萌.中国海洋大学 2013
[6]稀有鲍鲫dead end基因的克隆及其功能研究[D]. 段俊丹.华中师范大学 2013
[7]二、三和四倍体虹鳟Oncorhynchus mykiss精子生物学研究[D]. 杨翟平.东北农业大学 2012
[8]虹鳟卵巢发育及相关系数研究[D]. 蔡海瑶.甘肃农业大学 2011
[9]三倍体虹鳟规模制种技术研究[D]. 王太.甘肃农业大学 2010



本文编号：3688197