水稻叶片衰老相关蛋白磷酸酶编码基因OsSAPP3功能分析

发布时间：2022-10-08 20:27

　　植株发育的最后一个阶段是叶片的衰老阶段,它将叶子中的资源降解并回收,用来维持新器官的生长。蛋白磷酸酶（protein phosphatase,PP）在整个衰老过程中可以催化蛋白质发生可逆磷酸化反应,这一现象是叶片中衰老细胞转导的关键环节。在植物中PP2C型蛋白磷酸酶是分布较多的一大类蛋白磷酸酶。前期研究中已经筛选出一个水稻的PP2C型蛋白磷酸酶编码基因,命名为OsSAPP3（Oryza sativa Senescence-Associated Protein Phosphatase,OsSAPP3）。通过研究发现,CaMV 35S启动子驱动OsSAPP3异源过表达导致35S-OsSAPP3转基因拟南芥无法正常完成生育史,于是我们用可诱导型启动子GVG系统驱动OsSAPP3过表达,获得转基因水稻和拟南芥用于后续实验研究。1.OsSAPP3基因克隆与转基因材料的获得我们分别构建了GVG-OsSAPP3和Pro_OsSAPP3-GUS植物双源表达载体,利用农杆菌介导的遗传转化法获得了相应的转基因水稻和转基因拟南芥。用潮霉素抗性筛选、PCR检测、荧光定量RT-PCR检测、G... 

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 植物叶片衰老
    1.2 影响叶片衰老因素
        1.2.1 叶龄与生长发育
        1.2.2 植物激素
        1.2.3 自由基
        1.2.4 不同外界非生物胁迫
    1.3 植物中的蛋白磷酸酶
        1.3.1 蛋白磷酸酶的种类
        1.3.2 蛋白磷酸酶的功能
        1.3.3 植物中PP2Cs的研究进展
    1.4 蛋白质可逆磷酸化参与叶片衰老调控过程
    1.5 本研究的研究内容和意义
第二章 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 生物试剂
        2.1.3 宿主菌及植物载体
    2.2 试验方法
        2.2.1 克隆基因与双源表达载体构建
        2.2.2 获得T0代转基因植物
        2.2.3 转基因植物的纯合筛选
        2.2.4 ProOsSAPP3-GUS转基因水稻的表达模式分析
        2.2.5 ProOsSAPP3-GUS转基因水稻对外源激素的响应
        2.2.6 外源诱导OsSAPP3过表达后GVG-OsSAPP3转基因拟南芥表型观察
        2.2.7 转基因拟南芥衰老标志基因表达变化分析
        2.2.8 转基因水稻的表型观察
        2.2.9 转基因水稻衰老标志基因表达变化分析
    2.3 数据分析
第三章 结果与分析
    3.1 OsSAPP3基因克隆及植物双源表达载体构建
        3.1.1 OsSAPP3的基因克隆
        3.1.2 OsSAPP3植物表达载体构建
        3.1.3 ProOsSAPP3-GUS植物表达载体构建
    3.2 转基因植物的获得
        3.2.1 转基因拟南芥的获得
        3.2.2 转基因拟南芥基因表达水平检测
        3.2.3 转基因水稻的获得
        3.2.4 转基因水稻基因表达水平检测
        3.2.5 ProOsSAPP3-GUS转基因植物的鉴定
    3.3 ProOsSAPP3-GUS转基因植物启动子活性分析
        3.3.1 ProOsSAPP3-GUS转基因水稻植物组织表达特性分析
        3.3.2 ProOsSAPP3-GUS转基因水稻对外源激素的响应
    3.4 外源诱导OsSAPP3基因异源过表达促进转基因拟南芥早衰
    3.5 外源诱导OsSAPP3基因异源过表达影响衰老相关标志基因表达
    3.6 外源诱导OsSAPP3基因过表达促进GVG-OsSAPP3转基因水稻叶片早衰
    3.7 外源诱导OsSAPP3过表达影响转基因水稻中衰老相关标志基因表达
    3.8 黑暗诱导促进GVG-OsSAPP3转基因水稻叶片衰老加速
    3.9 黑暗诱导后GVG-OsSAPP3转基因水稻中衰老相关标志基因表达变化
第四章 讨论
    4.1 ProOsSAPP3-GUS转基因水稻组织表达模式分析与外源激素的响应
    4.2 外源DEX诱导促进GVG-OsSAPP3转基因植物发生早衰
    4.3 GVG-OsSAPP3转基因植物的基因表达量分析
    4.4 GVG-OsSAPP3转基因水稻对黑暗胁迫的响应
参考文献
致谢
缩略词表
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【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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[5]一个水稻早衰突变体pse（t）的遗传分析、定位及生理学研究[D]. 李付振.浙江大学 2005

硕士论文
[1]水稻叶片衰老相关蛋白磷酸酶编码基因OsSAPP2的克隆及初步功能分析[D]. 蒋太英.沈阳农业大学 2017



本文编号：3688377