转丝胶蛋白（Ser3）和丝素重链相似蛋白（Hpl）基因对家蚕后部丝腺蛋白质合成和分泌的差异影响机制

发布时间：2022-11-06 12:10

　　家蚕丝腺是人类驯化和畜牧化饲养家蚕的靶组织,拥有已知昆虫中最强大的合成和分泌蛋白的能力,丝腺丝腺生物反应器也广受业者期待。目前为止,大量的转基因家蚕的丝腺普遍存在外源蛋白表达效率低,丝腺发育不良的现象。本实验室利用piggyBac转座子,获得了 2个后部丝腺高效表达丝胶蛋白（Ser3）和丝素重链相似蛋白（Hpl）的转基因家蚕纯系SER和TBH,SER后部丝腺发育正常,而TBH后部丝腺发育异常。本文通过丝腺组织发育和细胞结构、调控蛋白质合成与分泌的分子信号通路等方面的研究,比较了 SER和TBH家蚕后部丝腺发育的差异机制。主要结果如下:TBH和SER家蚕的后部丝腺细胞分别能够高效地合成Hpl或Ser3蛋白。Ser3蛋白能够无障碍地从腺细胞分泌至腺腔,对丝腺细胞核复制和丝腺生长没有统计意义的不良影响。TBH家蚕后部丝腺的腺细胞核DNA复制速度下降,后部丝腺生长受到显著抑制。TBH家蚕后部丝腺合成的蛋白质分泌到腺腔量显著减少,细胞内中出现大量的蛋白小泡堆积,细胞内质网、高尔基体等结构逐渐消失,并诱导细胞自噬凋亡水平上调。进一步的磷酸化蛋白质组学分析结果显示,与野生型相比,TBH家蚕后部丝腺细... 

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中文摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 家蚕丝腺的生长发育和退化
        1.1.1 丝腺的构成
        1.1.2 丝腺的生长发育
        1.1.3 丝腺的退化
    1.2 家蚕丝素蛋白组成及其基因表达调控
        1.2.1 丝素蛋白的组成
        1.2.2 丝素蛋白基因表达调控
    1.3 转基因家蚕的研究现状
        1.3.1 转基因技术
        1.3.2 转基因家蚕研究现状及展望
    1.4 论文研究思路
        1.4.1 研究目的与意义
        1.4.2 研究目标与内容
        1.4.3 研究技术路线
2 试验材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 蚕品种
        2.1.2 主要试剂和试剂盒
    2.2 主要仪器设备
    2.3 试验方法
        2.3.1 总RNA提取
        2.3.2 DNA消化
        2.3.3 RNA反转录
        2.3.4 实时定量PCR
        2.3.5 丝胶含量测定
        2.3.6 石蜡切片制备
        2.3.7 HE染色
        2.3.8 DAPI染色
        2.3.9 EDU检测
        2.3.10 TUNEL染色
        2.3.11 溶酶体染色
        2.3.12 钙离子染色
        2.3.13 透射电镜
        2.3.14 磷酸化蛋白质组学
3 结果与分析
    3.1 表达不同的外源蛋白对丝腺生长发育的影响差异
    3.2 表达不同的外源蛋白对家蚕吐丝功能的影响差异
    3.3 表达不同的外源蛋白对家蚕丝腺细胞DNA复制的影响差异
    3.4 外源蛋白在丝腺中的表达促进丝腺细胞自噬凋亡
    3.5 外源蛋白在丝腺中的表达对丝素蛋白合成能力的影响
    3.6 外源蛋白在丝腺中的表达对后部丝腺细胞蛋白分泌的影响
    3.7 磷酸化蛋白组学分析
4 讨论与结论
    4.1 未正确折叠蛋白的积累引起内质网应激反应
    4.2 过长的内质网应激反应诱导细胞凋亡
    4.3 未折叠蛋白反应通路分析
    4.4 综合结论
参考文献
在读期间参与项目与科研成果
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]特异性下调内质网分子伴侣GRP94对人大肠癌细胞生物学特性影响的研究[D]. 陈瑶.中国医科大学 2003



本文编号：3703477