西瓜噬酸菌phoB、phoR及Aave 2 620基因功能研究

发布时间：2022-11-07 20:13

　　西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli）为瓜类细菌性果斑病（bacterial fruit blotch,BFB）病原菌,菌体形态特征为单根极生鞭毛,不产生荧光并且好氧类细菌,革兰氏染色阴性。果斑病是世界范围内的细菌性检疫病害,为中国出入境重点检疫对象,其主要通过种子带菌传播的方式,对世界各地的西瓜、甜瓜等葫芦科作物造成严重的危害,对产业经济带来巨大的损失。细菌中的c-di-GMP信号途径和双组分调控系统是两个复杂且又截然不同的生理过程,细菌的毒性、运动性及生物膜形成能力对致病性的影响至关重要。本试验从c-diGMP信号调控和双组分信号调控这两个角度来研究基因Aave₂620及phoB与phoR对致病性相关表型的影响。我们分析了Aave₂620,phoB与phoR基因生物信息学,包括结构域功能,还通过三亲本杂交及同源重组双交换,成功构建Aave₂620,phoB与phoR基因的单基因缺失突变菌株ΔAave₂620、ΔphoB、ΔphoR和回补菌株ΔAave₂620c... 

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 果斑病及西瓜噬酸菌简介
        1.1.1 果斑病简介
        1.1.2 西瓜噬酸菌简介
        1.1.3 西瓜噬酸菌常见调控系统及调控因子
        1.1.4 西瓜噬酸菌的检测与防治
    1.2 C-di-GMP信号传导系统
        1.2.1 C-di-GMP信号调节机理
        1.2.2 C-di-GMP的胞内分布及影响
        1.2.3 C-di-GMP对细菌致病相关表型的调控
    1.3 双组分信号传导系统
        1.3.1 双组分信号传导系统简介
        1.3.2 TCS感应信号特征及传导方式
        1.3.3 TCS对细菌致病性的影响
    1.4 Pho B/Pho R蛋白相关研究
    1.5 实验内容及技术路线
        1.5.1 实验内容
        1.5.2 技术路线
    1.6 研究目的及意义
第二章 西瓜噬酸菌Aave_2620、phoB与 phoR基因生物信息学分析
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 西瓜噬酸菌基因Aave_2620、phoB与 phoR基本信息
        2.2.2 西瓜噬酸菌Aave_2620、phoB与 phoR基因结构域预测
    2.3 结果与分析
        2.3.1 西瓜噬酸菌Aave_2620生物信息学分析
        2.3.2 西瓜噬酸菌phoB生物信息学分析
        2.3.3 西瓜噬酸菌phoR生物信息学分析
    2.4 小结与讨论
第三章 西瓜噬酸菌Aave_2620、phoB与 phoR突变株构建及功能分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌株及质粒
        3.1.2 仪器及设备
        3.1.3 试剂及抗生素
        3.1.4 培养基的种类及制备
        3.1.5 试验植株
    3.2 实验方法
        3.2.1 引物设计
        3.2.2 构建单突变菌株ΔAave_2620、ΔphoB及 ΔphoR
        3.2.3 互补菌株的获取
        3.2.4 致病性测定
        3.2.5 烟草致敏性
        3.2.6 运动能力的测定
        3.2.7 生物膜形成能力测定
        3.2.8 体内、外生长能力测定
        3.2.9 数据分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 重组及互补载体的构建
        3.3.2 突变株及互补菌株筛选与获取
        3.3.3 致病性测定结果
        3.3.4 烟草过敏性反应测定结果
        3.3.5 运动性测定结果
        3.3.6 生物膜形成能力测定结果
        3.3.7 体内、外生长能力测定结果
    3.4 小结与讨论
第四章 相关基因表达量测定与分析
    4.1 实验材料
        4.1.1 供试菌株
        4.1.2 试剂及仪器
    4.2 方法
        4.2.1 qRT-PCR引物设计
        4.2.2 供试菌株RNA提取及反转录
        4.2.3 三型分泌系统及毒力相关基因表达量测定
        4.2.4 鞭毛相关基因表达量测定
        4.2.5 目的基因之间调控关系测定
        4.2.6 数据分析
    4.3 测定结果
        4.3.1 致病相关基因表达量测定结果
        4.3.2 目的基因之间调控关系测定结果
    4.4 小结与讨论
第五章 西瓜噬酸菌phoB/phoR双缺失突变株构建及功能分析
    5.1 实验材料
        5.1.1 菌株及质粒
        5.1.2 仪器及设备
        5.1.3 抗生素种类
        5.1.4 培养基制备
        5.1.5 植株材料
    5.2 实验方法
        5.2.1 实验相关引物设计
        5.2.2 双缺失突变株ΔphoB/phoR构建
        5.2.3 供试菌株RNA的提取及反转录
        5.2.4 接种实验
        5.2.5 烟草致敏性测定
        5.2.6 致病相关基因表达量测定
        5.2.7 测定运动性
        5.2.8 测定生物膜
        5.2.9 测定生长能力
        5.2.10 数据分析
    5.3 实验结果与分析
        5.3.1 上下游片段克隆
        5.3.2 突变株筛选及获得
        5.3.3 致病性测定结果
        5.3.4 烟草致敏性测定结果
        5.3.5 致病相关基因表达量测定结果
        5.3.6 运动能力测定结果
        5.3.7 生物膜形成能力测定结果
        5.3.8 体内、外生长能力测定结果
    5.4 小结与讨论
第六章 全文结论及展望
    6.1 Aave_2620、phoB与 phoR之间存在调控关系
    6.2 基因Aave_2620的缺失,使野生型菌株致病力降低
    6.3 基因phoB与 phoR的单缺失,对致病相关影响有差异
    6.4 phoB与 phoR的双缺失,使Aac5 菌株致病力显著增强
    6.5 展望
参考文献
作者简介
致谢



本文编号：3704326