光裸星虫早期发育观察及卵母细胞发育关键基因的研究

发布时间：2022-12-06 05:30

　　光裸星虫（Sipunculus nudus）具有很高的经济价值和生态价值,现有的光裸星虫繁殖生物学研究薄弱,制约了人工繁育技术的提高。光裸星虫生殖细胞在体腔液中游离发育,不同发育时期的卵母细胞各自独立。本研究利用超微结构观察结合转录组测序认识光裸星虫卵母细胞发育的分子生物学过程,筛选关键基因并进行克隆和表达验证。研究结果可为光裸星虫生殖调控及人工育苗提供数据支撑和理论指导,也可为无脊椎动物卵子发生的分子机制研究积累基础资料。具体研究结果如下:1、利用光镜和电子显微镜观察了光裸星虫卵母细胞、胚胎及幼体发育过程,结果表明:（1）可依据卵母细胞超微结构及存在场所的变化将发育过程划分为6个阶段,其中Egg1-Egg4在体腔液中发育,为卵母细胞生长阶段,主要进行各种物质的合成和积累;Egg5在肾管中发育,生发泡发生破裂（GVBD）;Egg6为排放到水体中的卵母细胞。（2）确定了Egg1-Egg4与卵径之间存在对应关系,可利用细胞筛进行分级分离。（3）胚胎及幼体发育经历卵裂、囊胚、原肠胚、担轮幼虫、海球幼体、匍匐幼体等主要阶段,从卵裂到担轮幼虫均在卵黄膜内发育;海球幼体出膜即可快速游动,以浮游植物... 

【文章页数】：156 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 星虫动物简介
    2 星虫动物繁殖生物学研究进展
    3 卵母细胞发育过程研究
    4 无脊椎动物性腺或生殖细胞发育相关基因研究
        4.1 热休克蛋白基因
        4.2 成熟促进因子MPF
        4.3 卵黄蛋白原
        4.4 皮质颗粒的相关蛋白
        4.5 血凝素/变形细胞聚集因子
        4.6 铁蛋白
    5 转录组学在性腺发育研究中的应用
    6 研究目的与意义
第二章 光裸星虫卵母细胞及胚胎幼体发育过程的观察
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 所用仪器设备
        1.3 主要试剂
        1.4 样品制样与观察
    2 结果
        2.1 卵母细胞发育观察
        2.2 胚胎幼体发育观察
    3 讨论
        3.1 光裸星虫卵母细胞发育
        3.2 光裸星虫胚胎幼体发育
第三章 光裸星虫卵母细胞转录组测序与分析
    1 材料与方法
    2 结果
        2.1 转录组数据过滤
        2.2 Denovo组装和质量评估
        2.3 基因注释
        2.4 基因定量
        2.5 转录组差异表达基因检测
        2.6 代谢通路富集分析
        2.7 卵母细胞发育相关基因筛选
    3 讨论
        3.1 转录组基础分析
        3.2 卵母细胞周期界定
        3.3 卵母细胞发育相关基因
第四章 光裸星虫定量分析实验中内参基因的筛选
    1 材料与方法
    2 结果
        2.1 光裸星虫全组织内参筛选
        2.2 卵母细胞内参筛选
    3 讨论
        3.1 全组织内参筛选
        3.2 卵母细胞内参筛选
第五章 光裸星虫卵母细胞发育相关基因的克隆及表达分析
    1 材料与方法
    2 结果
        2.1 光裸星虫Vg基因的克隆及表达分析
        2.2 光裸星虫Peritrophin基因的克隆及表达分析
        2.3 光裸星虫FoxL2 基因的克隆及表达分析
        2.4 光裸星虫Ferritin基因的克隆及表达分析
        2.5 光裸星虫Hsp90 基因的克隆及表达分析
    3 讨论
        3.1 光裸星虫Vg基因的生物信息学及表达分析
        3.2 光裸星虫Peritrophin基因的生物信息学及表达分析
        3.3 光裸星虫FoxL2 基因的的生物信息学及表达分析
        3.4 光裸星虫Ferritin基因的的生物信息学及表达分析
        3.5 光裸星虫Hsp90 基因的的生物信息学及表达分析
第六章 自动化小型养殖设施的设计
    1 小水体降温系统
    2 微型调频气泵
    3 微粒饲料投料装置
    4 微粒饲料混合和分配装置
第七章 结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]斑马鱼早期胚胎发育囊胚sphere时期的蛋白组学研究[J]. 陈漪,胡瑞芹,冉皓宇,陈良标.  海洋渔业. 2019(01)
[2]光裸星虫（Sipunculus nudus）不同发育时期卵细胞内参基因的筛选[J]. 张家炜,邬婧,周丹,郑哲,王庆恒.  基因组学与应用生物学. 2020(02)
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[4]大鲵不同发育阶段及组织中内参基因稳定性评价[J]. 崔丹,蓝青景,刘然然,王立新.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2017(10)
[5]猪睾丸组织定量PCR分析中内参基因的选择[J]. 彭馥芝,冉茂良,翁波,李智,董莲花,陈斌.  中国农业科学. 2017(15)
[6]平欧杂种榛实时荧光定量PCR内参基因的筛选与体系建立[J]. 杨丹,李清,王贵禧,马庆华,朱利泉.  中国农业科学. 2017(12)
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博士论文
[1]日本沼虾雌性性早熟相关基因的筛选、克隆、表达与功能分析[D]. 江红霞.西北农林科技大学 2017
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[5]1.TBP和TLP对hTERT的转录调节作用及机制 2.DNA甲基化在宫颈癌诊断中的应用[D]. 杨楠.北京大学 2008
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硕士论文
[1]曼氏无针乌贼雌激素受体基因的克隆、表达及生殖调控功能初探[D]. 刘婉.浙江海洋大学 2016
[2]中华绒螯蟹性早熟分子机制的初步研究[D]. 慈元吉.上海海洋大学 2015
[3]孕激素（DHP）在硬骨鱼类减数分裂启动过程中的作用机制研究[D]. 刘刚.西南大学 2014
[4]尼罗罗非鱼性腺发育过程的转录组学研究及Fox家族生物信息学分析[D]. 袁静.西南大学 2013
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[7]拟穴青蟹细胞周期及泛素系统若干基因参与性腺发育的研究[D]. 韩坤煌.集美大学 2010
[8]MPF对精母细胞减数分裂调控作用的研究[D]. 白汝岚.西南大学 2008



本文编号：3711159