水稻Wx基因第10外显子单碱基变异位点SNP 10 C/T 效应分析
发布时间：2022-12-07 06:29
水稻胚乳中直链淀粉含量是影响稻米品质最主要的因素,而其主要受蜡质基因（Waxy,Wx）调控。Wx基因的等位变异是造成稻属中直链淀粉含量广泛变异的重要原因;挖掘并研究新的等位变异位点,可进一步揭示稻米品质形成及其变异的遗传机理,更可为稻米品质改良提供新的基因资源和途径。在前期的实验中,我们鉴定了一个控制稻米高直链淀粉含量但低淀粉粘滞性的Wx等位基因,Wxlsv。通过序列比对,发现Wxlsv与Wxa的编码区仅在第10外显子处存在一个单碱基C-T差异,我们将该单碱基变异位点命名为SNP10C/T。对其它已知Wx等位基因测序发现,只有Wx2在该位置处为T,其它Wx等位基因都是C,与Wxlsv相同。为明确此单碱基差异在稻米淀粉品质形成调控中的分子机理,开展了以下研究:1、构建了Wxa与Wxlsv的功能验证表达载体,并转化糯稻Nip（wx）,与未转化对照Nip（wx）相比,转基因植株基本农艺性状没有受到影响,但是籽粒变得透明。Nip（wx）-Wxlsv与Nip（wx）-Wxa转基因稻米相比,表观直链淀粉含量显著提高,胶稠度下降,淀粉粘滞性显著降低。同时又将Wxlsv表达载体单独转化Nip（Wxa）...
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
1 文献综述
1.1 稻米的蒸煮与食味品质
1.1.1 直链淀粉含量
1.1.2 胶稠度
1.1.3 糊化温度
1.1.4 淀粉粘滞性
1.2 水稻蜡质基因Wx
1.2.1 Wx基因的等位变异类型
1.2.2 Wx基因的表达调控
1.2.3 Wx等位基因在育种中的应用
1.3 本研究的目的及意义
2 材料与方法
2.1 实验材料与试剂
2.2 质粒DNA的提取、酶切、连接与转化
2.3 DNA的克隆与序列分析
2.4 功能验证载体的构建
2.5 根瘤农杆菌介导的水稻转化
2.6 转基因水稻的检测
2.7 稻米样品的前处理
2.8 稻米品质的测定
2.8.1 表观直链淀粉含量的测定
2.8.2 胶稠度的测定
2.8.3 RVA谱的测定
2.8.4 食味值的测定
2.9 淀粉的提取
2.10 淀粉的去脂
2.11 水稻胚乳总RNA提取
2.12 第一链cDNA的获得
2.13 实时荧光定量RT-PCR
2.14 蛋白的SDS-PAGE分析
2.15 GBSSI蛋白的磷酸化测序
2.16 GBSSI酶活的测定
2.17 GBSSI蛋白的同源建模
2.18 稻米及淀粉体外消化特性的测定
2.19 统计分析
3 结果与分析
3.1 SNP_(10)~(C/T)的转基因功能验证
3.1.1 功能验证载体的构建
3.1.2 T_0代转基因植株的鉴定
3.1.3 转基因水稻纯系的筛选
3.1.4 转基因植株表型分析
3.1.5 Wx基因在转基因水稻胚乳中的表达分析
3.1.6 转基因稻米成熟种子中蛋白水平表达分析
3.1.7 转基因稻米理化品质的测定
3.1.8 转基因稻米淀粉粘滞性比较
3.2 利用近等基因系分析SNP_(10)~(C/T)对稻米品质的效应
3.2.1 不同背景下近等基因系的构建及鉴定
3.2.2 近等基因系稻米理化品质分析
3.2.3 近等基因系淀粉消化速率分析
3.3 SNP_(10)~(C/T)对基因表达和酶活的效应分析
3.3.1 Wx基因转录水平表达分析
3.3.2 蛋白水平表达分析
3.3.3 GBSSI酶活比较
3.3.4 GBSSI蛋白结构及磷酸化位点分析
3.4 SNP_(10)~(C/T)在其它Wx等位基因背景下对稻米品质的效应
3.4.1 转基因材料的创建与鉴定
3.4.2 SNP_(10)~(C/T)在Wx~(mp)背景下的效应
3.4.3 SNP_(10)~(C/T)在Wx~b背景下的效应
3.4.4 SNP_(10)~(C/T)在Wx~(in)背景下的效应
4 小结与讨论
4.1 小结
4.2 Wx基因SNP_(10)~(C/T)的效应分析
4.3 Wx~(lsv)与SNP_(10)~(C/T)在育种中的应用前景
4.4 研究展望
参考文献
致谢
本文编号：3712401
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
1 文献综述
1.1 稻米的蒸煮与食味品质
1.1.1 直链淀粉含量
1.1.2 胶稠度
1.1.3 糊化温度
1.1.4 淀粉粘滞性
1.2 水稻蜡质基因Wx
1.2.1 Wx基因的等位变异类型
1.2.2 Wx基因的表达调控
1.2.3 Wx等位基因在育种中的应用
1.3 本研究的目的及意义
2 材料与方法
2.1 实验材料与试剂
2.2 质粒DNA的提取、酶切、连接与转化
2.3 DNA的克隆与序列分析
2.4 功能验证载体的构建
2.5 根瘤农杆菌介导的水稻转化
2.6 转基因水稻的检测
2.7 稻米样品的前处理
2.8 稻米品质的测定
2.8.1 表观直链淀粉含量的测定
2.8.2 胶稠度的测定
2.8.3 RVA谱的测定
2.8.4 食味值的测定
2.9 淀粉的提取
2.10 淀粉的去脂
2.11 水稻胚乳总RNA提取
2.12 第一链cDNA的获得
2.13 实时荧光定量RT-PCR
2.14 蛋白的SDS-PAGE分析
2.15 GBSSI蛋白的磷酸化测序
2.16 GBSSI酶活的测定
2.17 GBSSI蛋白的同源建模
2.18 稻米及淀粉体外消化特性的测定
2.19 统计分析
3 结果与分析
3.1 SNP_(10)~(C/T)的转基因功能验证
3.1.1 功能验证载体的构建
3.1.2 T_0代转基因植株的鉴定
3.1.3 转基因水稻纯系的筛选
3.1.4 转基因植株表型分析
3.1.5 Wx基因在转基因水稻胚乳中的表达分析
3.1.6 转基因稻米成熟种子中蛋白水平表达分析
3.1.7 转基因稻米理化品质的测定
3.1.8 转基因稻米淀粉粘滞性比较
3.2 利用近等基因系分析SNP_(10)~(C/T)对稻米品质的效应
3.2.1 不同背景下近等基因系的构建及鉴定
3.2.2 近等基因系稻米理化品质分析
3.2.3 近等基因系淀粉消化速率分析
3.3 SNP_(10)~(C/T)对基因表达和酶活的效应分析
3.3.1 Wx基因转录水平表达分析
3.3.2 蛋白水平表达分析
3.3.3 GBSSI酶活比较
3.3.4 GBSSI蛋白结构及磷酸化位点分析
3.4 SNP_(10)~(C/T)在其它Wx等位基因背景下对稻米品质的效应
3.4.1 转基因材料的创建与鉴定
3.4.2 SNP_(10)~(C/T)在Wx~(mp)背景下的效应
3.4.3 SNP_(10)~(C/T)在Wx~b背景下的效应
3.4.4 SNP_(10)~(C/T)在Wx~(in)背景下的效应
4 小结与讨论
4.1 小结
4.2 Wx基因SNP_(10)~(C/T)的效应分析
4.3 Wx~(lsv)与SNP_(10)~(C/T)在育种中的应用前景
4.4 研究展望
参考文献
致谢
本文编号：3712401
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3712401.html
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