法氏柴胡宽蛾气味结合蛋白基因的克隆与表达

发布时间：2022-12-07 06:45

　　法氏柴胡宽蛾Depressaria falkovitshi Lvovsky作为本课题组在2013年发现的中国新纪录种,是我国柴胡种植区的一种优势害虫,主要以幼虫取食危害柴胡种子、嫩叶、茎尖和花蕾,虫害大发生时危害率可达90%,严重影响了柴胡的产量和品质。由于其繁殖力强、自然天敌少且具有卷叶习性等特点难以防治。研究法氏柴胡宽蛾的气味结合蛋白有助于深入了解昆虫的嗅觉机制,可进一步研究法氏柴胡宽蛾与寄主植物的关系,进而为研发相关的引诱剂、趋避剂等新型药剂提供新思路。为此,本研究利用法氏柴胡宽蛾转录组数据,通过生物信息学和分子生物学相结合的方法,从法氏柴胡宽蛾中克隆了2个气味结合蛋白基因,并对其进行了体外表达,测定了它们的表达谱。主要研究结果如下:1.结合法氏柴胡宽蛾成虫转录组数据分析并利用RT-PCR技术,本研究成功克隆得到两个气味结合蛋白基因DfalOBP1（GenBank登录号:MG882075）和DfalOBP3（GenBank登录号:MG882077）。DfalOBP1基因开放阅读框长420bp,编码139个氨基酸,N-末端包含18个氨基酸组成的信号肽,预测蛋白分子量大小为16.22... 

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1 引言
    1.1 法氏柴胡宽蛾
        1.1.1 法氏柴胡宽蛾形态特征
        1.1.2 法氏柴胡宽蛾危害特点
        1.1.3 法氏柴胡宽蛾的研究现状
    1.2 嗅觉感器
    1.3 嗅觉感受机制
    1.4 气味结合蛋白研究进展
        1.4.1 种类
        1.4.2 分布
        1.4.3 生化特性
        1.4.4 生理功能
        1.4.5 三维结构
        1.4.6 配体的结合和释放机制
        1.4.7 研究方法
    1.5 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 供试昆虫
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要设备仪器
    2.2 方法
        2.2.1 基因扩增
        2.2.2 构建表达载体
        2.2.3 蛋白表达
        2.2.4 内参基因的筛选
        2.2.5 组织表达
3 结果与分析
    3.1 基因分析
        3.1.1 总RNA提取质量检测
        3.1.2 DfalOBP1和DfalOBP3 基因序列分析
        3.1.3 DfalOBP1和DfalOBP3 三维结构模拟
        3.1.4 DfalOBP1和DfalOBP3 序列比对分析
        3.1.5 DfalOBP1和DfalOBP3 系统进化分析
    3.2 蛋白表达
    3.3 内参基因筛选
        3.3.1 候选内参基因的克隆及荧光定量引物分析
        3.3.2 候选内参基因的表达水平
        3.3.3 候选内参基因的表达稳定性分析
    3.4 组织表达
4 讨论
5 结论
参考文献
在读期间发表的学术论文
附件
作者简历
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]梨小食心虫Minus-C气味结合蛋白的分子克隆、表达谱及结合特性分析[J]. 陈秀琳,苏丽,陈丽慧,李怡萍,仵均祥,李广伟.  昆虫学报. 2018(07)
[2]柑橘大实蝇气味结合蛋白基因BminOBP25的克隆、原核表达及组织表达分析[J]. 司品法,周琼,崔中翌.  昆虫学报. 2018(05)
[3]光肩星天牛气味结合蛋白AglaOBP12的基因克隆、表达及配体结合特征[J]. 李广伟,陈秀琳,尚天翠.  昆虫学报. 2017(10)
[4]印度谷螟实时荧光定量PCR内参基因的选择[J]. 唐培安,张棋麟,薛昊,袁明龙.  中国科学:生命科学. 2016(10)
[5]小菜蛾气味结合蛋白OBP2基因的克隆、表达谱及其结合特性分析[J]. 程小娟,蔡立君,郑丽双,覃江梅,黄宇萍,尤民生.  昆虫学报. 2016(04)
[6]暗黑鳃金龟气味结合蛋白HparOBP15a基因的克隆及功能分析[J]. 房迟琴,张鑫鑫,刘丹丹,李克斌,张帅,曹雅忠,樊东,尹姣.  昆虫学报. 2016(03)
[7]法氏柴胡宽蛾幼虫龄期的划分[J]. 万喻,刘廷辉,王静静,何运转.  应用昆虫学报. 2015(06)
[8]梨小食心虫触角感器的超微结构[J]. 张国辉,宋月芹,田晓丽,仵均祥.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(10)
[9]中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱[J]. 吉挺,沈芳,梁勤,吴黎明,刘振国,罗岳雄.  昆虫学报. 2014(08)
[10]危害柴胡的新害虫——法氏柴胡宽蛾（鳞翅目:小潜蛾科:宽蛾亚科）[J]. 刘廷辉,万喻,李后魂,何运转.  河北农业大学学报. 2014(04)

硕士论文
[1]三岛柴胡昆虫群落结构及主要害虫生物学特性的研究[D]. 万喻.河北农业大学 2015
[2]甜菜夜蛾气味结合蛋白的基因克隆、组织分布及配体结合能力分析[D]. 张婷.南京农业大学 2012



本文编号：3712423