CircRNA 1 00290对胃癌细胞生物学行为的影响及机制研究

发布时间：2022-12-07 23:00

　　目的:胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一。根据GLOBOCAN2018报道,在全世界范围内,其发病率和死亡率分别居于恶性肿瘤发病率及死亡率的第五位及第三位。到2014年,我国每年新增胃癌发病人数至41万,死亡人数至29.4万。目前,手术、放化疗及免疫治疗是胃癌的主要治疗手段,但由于胃癌的确切发病机制及侵袭转移机制目前仍尚不十分清楚,导致对胃癌无法进行理想的早期诊断及治疗。因此,当前亟需寻找与胃癌发生和预后相关的生物标志和胃癌精准治疗的新靶点。环状RNA（circμlar RNAs,circRNAs）是一类经特殊剪切形成的共价闭环RNA,它缺乏传统线性RNA的3’及5’末端,因其环状结构得名。目前发现circRNAs具有多种生物学功能,如作为分子“海绵”吸附微小核糖核酸（microRNA,miRNA）,参与转录及转录后调控,作为模板指导翻译等。研究表明,大量环状RNA参与了肿瘤的发生发展过程的调控,有望成为新的肿瘤标记物及治疗靶点。此外,由于circRNA具有miRNA分子“海绵”特性,可作为外源性miRNA的载体,因此也具有良好的临床应用前景。在胃癌中,CircRNA发挥的作用也受到越... 

【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :Circ RNA_100290 在胃癌组织中的表达及临床病理意义
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 试剂
            2.1.2 仪器
        2.2 研究对象
        2.3 研究方法
            2.3.1 新鲜胃癌组织RNA提取
            2.3.2 RNA反转录
            2.3.3 qRT-PCR检测
    3 结果
        3.1 胃癌组织中circ RNA_100290 表达显著上调
        3.2 circ RNA_100290 表达与胃癌Borrmann分型,淋巴结转移和TNM分期相关
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :Circ RNA_100290与mi R-29b-3p/ITGA11 轴在胃癌中的相关性研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 试剂
            2.1.2 仪器
        2.2 研究对象
        2.3 研究方法
            2.3.1 新鲜胃癌组织RNA提取及反转录
            2.3.2 qRT-PCR检测miRNA及 mRNA表达
            2.3.3 双荧光素酶基因报告系统检测验证结合位点
            2.3.4 生物信息学预测及公共数据库分析
    3 结果
        3.1 胃癌组织中miR-29b-3p的表达显著降低
        3.2 胃癌组织中circ RNA_100290与mi R-29b-3p表达成负相关
        3.3 Circ RNA_100290 可直接结合mi R-29b-3p
        3.4 胃癌组织中ITGA11的表达显著升高
        3.5 胃癌组织中mi R-29b-3p与 ITGA11 表达呈负相关
        3.6 ITGA11在胃癌中高表达与预后呈负相关
        3.7 胃癌中ITGA11高表达与胃癌分化程度及侵袭转移相关
        3.8 ITGA11的蛋白交互作用网络及功能富集分析
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :沉默circ RNA_100290 对胃癌细胞系AGS和 HGC-27 生物学行为的影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器设备
            2.1.3 研究对象
        2.2 方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 细胞转染
            2.2.3 细胞Total RNA提取及反转录
            2.2.4 qRT-PCR检测
            2.2.5 细胞划痕愈合实验
            2.2.6 Transwell细胞迁移实验
            2.2.7 Transwell细胞侵袭实验
            2.2.8 CCK-8实验
            2.2.9 平板克隆形成实验
            2.2.10 细胞周期检测(FCM)
            2.2.11 蛋白提取
            2.2.12 Western Blot
            2.2.13 统计学分析方法
    3 结果
        3.1 人正常胃上皮细胞及4 种胃癌细胞系中circ RNA_100290和mi R-29b-3p的表达
        3.2 Circ RNA_100290 沉默胃癌细胞株的构建
        3.3 沉默circ RNA_100290 可下调AGS和 HGC-27 细胞mi R-29b-3p表达,上调ITGA11 mRNA表达
        3.4 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS和 HGC-27 细胞的迁移能力
        3.5 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS和 HGC-27 细胞的迁移能力
        3.6 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS和 HGC-27 细胞的侵袭能力
        3.7 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS及 HGC-27 细胞的增殖活性
        3.8 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS及 HGC-27 细胞集落形成能力
        3.9 沉默circ RNA_100290 可诱导AGS及 HGC-27 细胞G0/G1 期阻滞
        3.10 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS及 HGC-27 细胞系EMT过程
    4 讨论
    5 结论
第四部分 :eIF4A3与circ RNA_100290 的转录调控
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器设备
            2.1.3 研究对象
        2.2 方法
            2.2.1 细胞培养、转染、RNA提取及q RT-PCR检测
            2.2.2 RNA结合蛋白免疫沉淀
            2.2.3 蛋白提取
            2.2.4 Western Blot
            2.2.5 生物信息学预测及公共数据库数据分析
            2.2.6 统计分析
    3 结果
        3.1 Circinteractome预测circ RNA_100290 结合蛋白
        3.2 沉默eIF4A3 可上调AGS和 HGC-27 细胞系circ RNA_100290 表达
        3.3 eIF4A3 可通过与circ RNA_100290 侧翼结合参与其转录调控
        3.4 eIF4A3 m RNA在胃癌组织中表达下调
        3.5 eIF4A3蛋白在胃癌组织中表达下调
        3.6 eIF4A3 m RNA表达与胃癌患者临床病理因素的关系
        3.7 eIF4A3表达与胃癌患者的预后相关
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)
[2]Genomic alterations and molecular subtypes of gastric cancers in Asians[J]. Xiang S.Ye,Chunping Yu,Amit Aggarwal,Christoph Reinhard.  Chinese Journal of Cancer. 2016(08)
[3]Lauren分型在胃癌预后评估中的临床意义[J]. 崔景利,梁寒,邓靖宇,丁学伟,潘源,张李,蔡明志,梁月祥,蒋楠.  中华消化杂志. 2014 (07)



本文编号：3713028