HES1基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响

发布时间：2022-12-25 16:17

　　肺癌作为致死率和发病率最高的恶性肿瘤,因其转移率高、复发率高、死亡率高和预后率低等特点逐渐成为世界范围内的一个公共卫生问题。肺癌的发生受多基因、多信号通路调控,因此,了解肺癌的发生发展和作用机制对临床治疗肺癌有重要意义。发状分裂相关增强子1（Hairy and enhancer of split homolog-1,HES1）属于前神经元碱性螺旋-环-螺旋（proneural basic helix-loop-helix,bHLH）转录因子家族的成员之一,多项研究表明HES1作为癌基因,不仅在多种实体瘤中表达异常,还与多种恶性肿瘤细胞的增殖和转移相关,并且在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中也存在HES1蛋白高表达,但是关于HES1对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭的影响还缺乏有效的研究。本实验通过慢病毒质粒感染法敲降HES1基因的表达,探讨HES1基因对人NSCLC增殖、迁移和侵袭等生物学过程的影响及作用机制。本文进行了如下研究:体外合成一条无关的shRNA和两条靶向HES1基因的shRNA,分别插入pLKO.1质粒中构成3个shRNA表... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
主要中英文缩略表
第1章 前言
    1.1 概述
    1.2 肺癌的研究现状
        1.2.1 严峻的肺癌患病形势
        1.2.2 肺癌的诊治方法
    1.3 肿瘤细胞的转移
        1.3.1 肿瘤转移前微环境
        1.3.2 肿瘤转移基因
        1.3.3 细胞外基质降解
        1.3.4 上皮间充质转化
    1.4 RNAi技术
        1.4.1 RNAi的作用机制
        1.4.2 RNAi的作用特点
    1.5 HES1
        1.5.1 HES1 的结构
        1.5.2 HES1 对发育的影响
        1.5.3 HES1 在多种肿瘤中异常表达
    1.6 本研究的目的及意义
    1.7 研究路线
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 质粒与菌种
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞的培养
        2.2.2 构建sh-HES1 载体
        2.2.3 慢病毒包装
        2.2.4 慢病毒感染
        2.2.5 RT-PCR 实验
        2.2.6 Western blot 实验
        2.2.7 MTT 实验
        2.2.8 伤口愈合实验
        2.2.9 细胞侵袭实验
        2.2.10 Transwell 迁移实验
        2.2.11 统计学方法
第3章 实验结果与分析
    3.1 常规条件培养下A549 细胞的形态
    3.2 非小细胞肺癌A549中HES1 的表达
    3.3 sh-HES1-2 抑制A549中HES1 的表达
    3.4 HES1 基因表达的下调对NSCLL A549 细胞增殖的影响
    3.5 HES1 基因表达的下调对NSCLL A549 细胞迁移的影响
        3.5.1 伤口愈伤实验结果
        3.5.2 Transwell迁移实验结果
    3.6 HES1 基因表达的下调对NSCLLA549 细胞侵袭的影响
    3.7 敲降HES1 基因对NSCLCA549 细胞中PI3K/AKT信号通路及EMT的影响
第4章 讨论
第5章 结论与展望
参考文献
致谢
在学期间的科研情况


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]ADAMTS-18基因沉默和过表达对肝癌细胞系MHCC-97H和HepG2增殖和侵袭能力的影响[D]. 覃玮.广西医科大学 2017
[2]Hes1与Akt/Stat3相互整合在缺血后适应中的心肌保护作用[D]. 赵勇.南昌大学 2014
[3]Hes1基因与原发性肝癌发生相关性的体内外实验研究[D]. 冯娜.第二军医大学 2013
[4]Hes1和Hes2差异性表达影响肝癌术后预后[D]. 樊啸.苏州大学 2012
[5]蛋白酶激活受体2基因沉默对肝癌SMMC-7721细胞增殖和侵袭迁移能力的影响[D]. 赵建业.河北医科大学 2012



本文编号：3726946