水稻细菌性条斑病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzicola缺失clpX和speE基因对其致病性的影

发布时间：2022-12-25 17:35

　　由水稻细菌性条斑病菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,简称Xoc）侵染水稻引起的水稻细菌性条斑病（Rice bacterial leaf streak,简称BLS）是危害水稻生产的一种重要植物细菌病害。该病害已成为继稻瘟病、白叶枯病、稻纹枯病后的又一大水稻病害,对中国和东南亚稻区的水稻造成严重危害。目前,有关细菌Xoc的致病机制尚缺乏全面深入的研究。鉴定Xoc的致病相关基因,解析不同基因的功能,对于揭示该病菌的致病机制具有重要意义。本研究利用转座子Tn5对水稻细菌性条斑病菌Xoc RS105进行转座子诱变,构建含有1500个菌株的突变体库。经过活体筛选,从1500个转座子插入突变体中获得2株致病性发生改变的突变体,编号分别为R-160和R-168。通过反向PCR方法扩增出两个突变体中转座子Tn5插入位点的侧翼序列,序列比对后发现突变体R-160和R-168中转座子Tn5分别插入到编码依赖于ATP的Clp蛋白酶ATP结合亚基基因clp X和亚精胺合成酶的编码基因spe E中。在此基础上,通过同源重组分别从Xoc RS105中敲除clp X和spe E基因获... 

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 水稻细菌性条斑病
        1.1.1 水稻细菌性条斑病菌的特征及其危害
        1.1.2 水稻细菌性条斑病的防治
    1.2 水稻细菌性条斑病菌的研究进展
        1.2.1 有关Ⅲ型分泌系统的研究
        1.2.2 有关DSF依赖性群体感应系统的研究
        1.2.3 胞外多糖等其它相关研究
    1.3 ClpX在细菌中功能
    1.4 亚精胺合成酶在生物体内的功能
    1.5 立题依据
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 供试菌株
        2.1.2 供试质粒
        2.1.3 供试引物
        2.1.4 培养基
        2.1.5 实验试剂
        2.1.6 供试种子
    2.2 实验方法
        2.2.1 小量质粒的提取
        2.2.2 水稻细菌性条斑病菌基因组DNA的提取
        2.2.3 大肠杆菌感受态细胞制备方法
        2.2.4 致病性测定方法
        2.2.5 转座子Tn5插入突变体库的构建
        2.2.6 致病能力相关基因的初步鉴定
        2.2.7 缺失菌株的构建
        2.2.8 基因互补菌株的构建
        2.2.9 野生型XocRS105及其衍生菌株表型测定
3 结果与分析
    3.1 筛选获得2个与致病性有关的转座子插入突变体
    3.2 构建基因缺失菌株和互补菌株以及致病能力的验证
        3.2.1 构建clp X和 spe E的基因敲除载体
        3.2.2 获得clp X和 spe E基因缺失菌株
        3.2.3 构建基因互补载体
        3.2.4 获得基因互补菌株
        3.2.5 基因clp X和 spe E参与Xoc RS105 对水稻的致病性
    3.3 clp X与 spe E基因的鉴定
        3.3.1 clpX基因的鉴定
        3.3.2 speE基因的鉴定
    3.4 野生型Xoc RS105、Δclp X及其互补菌株致病性相关型的测定
        3.4.1 运动能力的测定
        3.4.2 产胞外蛋白酶能力的测定
        3.4.3 产胞外多糖能力的测定
        3.4.4 细菌生长曲线的测定
        3.4.5 抗胁迫能力的测定
        3.4.6 耐热能力的测定
        3.4.7 在水稻叶片内定殖能力测定
    3.5 野生型Xoc RS105、Δspe E及其互补菌株致病性相关型的测定
        3.5.1 运动能力测定
        3.5.2 抗胁迫能力的测定
        3.5.3 耐热能力的测定
        3.5.4 在水稻叶片内定殖能力测定
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]OsBGLU19 and OsBGLU23 regulate disease resistance to bacterial leaf streak in rice[J]. LI Bei-bei,LIU Ying-gao,WU Tao,WANG Ji-peng,XIE Gui-rong,CHU Zhao-hui,DING Xin-hua.  Journal of Integrative Agriculture. 2019(06)
[2]水稻细菌性条斑病4种接种方法的比较[J]. 赵严,罗登杰,何圣贤,刘芳.  亚热带农业研究. 2018(04)
[3]水稻细菌性条斑病防治研究进展[J]. 汤帅,杨远航,潘素君,林木青,戴良英,李魏.  农学学报. 2018(11)
[4]An Inner Membrane Protein（Imp） of Xanthomonas oryzae pv. oryzicola Functions in Carbon Acquisition, EPS Production, Bacterial Motility and Virulence in Rice[J]. CAI Lu-lu,ZOU Li-fang,GE Ling,XUE Xiao-bo,ZOU Hua-song,CHEN Gong-you.  Journal of Integrative Agriculture. 2014(12)
[5]解淀粉芽孢杆菌Lx-11对水稻细菌性条斑病的防治效果[J]. 张荣胜,戴秀华,陈志谊.  江苏农业科学. 2014(10)
[6]水稻细菌性条斑病研究进展[J]. 张荣胜,陈志谊,刘永锋.  江苏农业学报. 2014(04)
[7]多胺在微生物中的研究进展[J]. 姚响文,周密,曹颖瑛,姜远英.  中国真菌学杂志. 2014(02)
[8]水稻条斑病菌胞外多糖相关基因的鉴定[J]. 周丹,邹丽芳,邹华松,陈功友.  微生物学报. 2011(10)
[9]水稻细菌性条斑病的研究概述[J]. 刘姮,李雪琴.  湖北植保. 2011(05)
[10]水稻细菌性条斑病菌中受DSF调控的鞭毛基因flgD、flgE的功能分析[J]. 殷芳群,赵延存,刘春晖,钱国良,范加勤,胡白石,刘凤权.  微生物学报. 2011(07)

硕士论文
[1]OsbHLH81基因在水稻抗条斑病和白叶枯病中的功能鉴定[D]. 左丽萍.山东农业大学 2018
[2]蜡样芽孢杆菌蛋白质量控制系统ClpX/Hsp100家族组分的生理功能分析[D]. 熊曦.河南大学 2017



本文编号：3727055