约氏疟原虫Cas9转基因虫株的构建和应用

发布时间：2023-01-09 12:24

　　疟疾（malaria）是由顶复亚门疟原虫（plasmodium）感染造成的,是一种经血液传播的劣性传染性疾病,与结核、艾滋病共同被世界卫生组织认定为世界传染性疾病。尽管全球公共卫生条件不断地改善,但目前全世界每年依然有数亿疟疾感染病例和数十万死亡病例。因此,认识疟原虫,消除疟疾是一个迫切需要解决的重大课题。迄今为止,CRISPR/Cas9是疟原虫基因功能研究中最为高效的修饰工具。但由于疟原虫有限的耐药筛选标记,使得研究者需要将所有的修饰元件整合到一个载体上,这就造成了载体容量过大;加之疟原虫红细胞胞内寄生的属性,电击转染的载体需要依次穿过四层膜结构才能到达疟原虫的细胞核;载体容量过大和复杂的膜结构均限制了电击转染的效率。为了平衡载体大小和电击转染效率的关系,我们将修饰元件中长约4.5kb的Sp.Cas9进行了内源基因座位的整合,从而将载体大小缩减为原来的一半;同时我们发现内源整合表达Sp.Cas9的虫株可以实现Cas9的转录、翻译及蛋白的细胞核定位;此外表达Sp.Cas9细胞的阳性率接近100%,显著高于质粒瞬时转染的效率（约50%）。为了验证该虫株进行基因修饰的可行性,我们分别选择了... 

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１．１－Ａ）??

3.1.B两个山eral独立克隆的PCR鉴定

图２．１．３．１－Ａ约氏疟原虫Ａｓｅｒａｉ载体的示意图??


本文编号：3729181