水产品抗生素耐药基因污染特性及检测方法研究

发布时间：2023-01-12 18:36

　　近年来,医疗和养殖中抗生素滥用引起的抗生素耐药基因（antibiotic resistance genes,ARGs）已经成为了一种危害公众健康的新型环境污染物。目前,针对水产品耐药菌和ARGs的研究较少,关于水产养殖环境ARGs污染研究结果表明,养殖水体和底泥环境中ARGs污染严重,且ARGs种类繁多。因此,开展养殖水产品中水产品中抗生素耐药菌和ARGs污染分布研究,同时建立ARGs检测方法是十分必要的。本研究以大黄鱼、鲫鱼、黄颡鱼、青鱼、泥鳅、罗氏沼虾6种浙江省主要消费水产品为研究对象,采用磺胺嘧啶、硫酸庆大霉素、恩诺沙星、头孢氨苄、土霉素、氯霉素抗性平板筛选耐药细菌,基于16S rDNA序列分析完成菌株的鉴定,通过药敏试验分析分离菌株对复方新诺明、庆大霉素、恩诺沙星、头孢氨苄、四环素、氯霉素6种抗生素的敏感性,采用PCR对sul2（磺胺类）、aac（6’）-Ib（氨基糖苷类）、qnrS（喹诺酮类）、blaPSE（β-内酰胺类）、tetA（四环素类）、cmlA（氯霉素类）、floR（氯霉素类）共7种耐药基因进行扩增,评估菌株的耐药表型及基因型的符合情况,针对aac（6’）-Ib、c... 

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩写、符号清单和术语表
第1章 引言
    1.1 抗生素及耐药基因
        1.1.1 抗生素
        1.1.2 耐药基因
    1.2 水产品中抗生素耐药基因(ARGs)的污染现状
    1.3 细菌耐药性检测方法的研究现状
        1.3.1 传统微生物抑制方法
        1.3.2 分子生物学技术
    1.4 立题依据与研究内容
        1.4.1 立题依据
        1.4.2 研究内容
第2章 养殖水产品耐药菌分离及16S rDNA鉴定
    2.1 材料与仪器
        2.1.1 样品采集
        2.1.2 主要仪器与试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 样品处理
        2.2.2 菌株分离培养
        2.2.3 菌株纯化
        2.2.4 菌株鉴定
        2.2.5 数据分析
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 养殖水产品中的抗生素耐药菌数
        2.3.2 菌株分离鉴定结果
        2.3.3 养殖水产品中耐药细菌的分布
    2.4 本章小结
第3章 分离菌株的耐药表型及基因型分析
    3.1 材料与仪器
        3.1.1 阳性菌株
        3.1.2 分离菌株
        3.1.3 主要仪器与试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 药物敏感性试验
        3.2.2 药敏试验结果判定标准
        3.2.3 ARGs PCR扩增
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 药敏试验结果
        3.3.2 分离菌株耐药表型与耐药基因符合率分析
    3.4 本章小结
第4章 ARGs多重PCR检测方法的建立
    4.1 材料与仪器
        4.1.1 阳性菌株
        4.1.2 样品采集
        4.1.3 主要仪器与试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 引物的设计
        4.2.2 多重PCR方法的建立
        4.2.3 多重PCR方法的特异性试验
        4.2.4 多重PCR方法的灵敏度试验
        4.2.5 多重PCR方法检测市售水产品ARGs污染
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 多重PCR产物测序结果
        4.3.2 多重PCR方法的特异性
        4.3.3 多重PCR方法的灵敏度
        4.3.4 多重PCR方法检测市售水产品ARGs污染
    4.4 本章小结
第5章 ARGs实时荧光定量PCR检测方法的建立
    5.1 材料与仪器
        5.1.1 阳性菌株
        5.1.2 主要仪器与试剂
    5.2 实验方法
        5.2.1 质粒标准品的构建
        5.2.2 qPCR反应条件
        5.2.3 目的基因的标准曲线建立
        5.2.4 市售水产品ARGs qPCR分析
        5.2.5 数据分析
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 质粒DNA测序结果
        5.3.2 标准曲线
        5.3.3 市售水产品ARGs相对丰度
        5.3.4 ARGs与intⅠ1相对丰度间相关性分析
    5.4 本章小结
第6章 结论、创新点与展望
    6.1 结论
    6.2 创新点
    6.3 展望
参考文献
附录一 136株菌株菌种鉴定结果
附录二 研究生期间发表的论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]粪源环丙沙星对潮土中抗生素抗性基因的影响[J]. 常旭卉,贾书刚,王淑平,周志强.  农业环境科学学报. 2018(12)
[2]SYBR GreenⅡ黄芩18S rRNA基因实时荧光定量PCR方法的建立[J]. 王帅,程林,杨利民,韩梅.  分子植物育种. 2019(06)
[3]市售牛奶中4种四环素类抗生素抗性基因的比较研究[J]. 何玘霜,陆安祥.  食品安全质量检测学报. 2018(17)
[4]SPE-LC-MS/MS同时测定水中9种β-内酰胺类抗生素[J]. 何欣,聂晓静,赵红霞,马洋帆.  环境科学与技术. 2018(02)
[5]抗生素vs细菌[J]. 郭亚楠.  当代学生. 2017(19)
[6]畜禽粪便中多重耐药细菌及耐药基因的分布特征[J]. 张昊,王盼亮,杨清香,俞宁.  环境科学. 2018(01)
[7]结核分枝杆菌耐药相关基因扩增多重PCR体系的建立与评估[J]. 李自慧,潘丽萍,孙琦,吕翎娜,杜博平,张洪静,孙照刚,张宗德.  中国防痨杂志. 2017 (08)
[8]辽河流域地表水中典型抗生素污染特征及生态风险评估[J]. 张晓娇,柏杨巍,张远,马淑芹,郭昌胜,张莉.  环境科学. 2017(11)
[9]鲍消化道及其养殖水体异养菌的耐药性研究[J]. 孙永婵,王瑞旋,赵曼曼,曹超,鲁义善,姚托,王江勇.  南方水产科学. 2017(03)
[10]广州市售鱼、虾、蛤蚌中四环素耐药菌及四环素耐药基因的研究[J]. 余丽,熊丽娜,石磊,叶蕾.  现代食品科技. 2016(10)

博士论文
[1]规模化猪场粪污中典型抗生素归趋行为及抗性基因扩散特征研究[D]. 李晓华.中国农业科学院 2018
[2]中国流域典型新型有机污染物排放量估算、多介质归趋模拟及生态风险评估[D]. 张芊芊.中国科学院研究生院(广州地球化学研究所) 2015
[3]牦牛、牧民源大肠杆菌分离鉴定、耐药基因检测、PFGE分析及耐药性传递的研究[D]. 羊云飞.四川农业大学 2011
[4]水中溶解性物质对氯霉素类和氟喹诺酮类抗生素光降解的影响[D]. 葛林科.大连理工大学 2009
[5]太湖富营养化水体和底泥中微生物群落的分子生态学研究[D]. 叶文瑾.上海交通大学 2009

硕士论文
[1]环丙沙星对土壤抗性基因和微生物群落的影响[D]. 脱霞霞.西北农林科技大学 2018
[2]水产品及渔用饲料中11种氨基糖苷类药物超高效液相色谱—串联质谱检测方法的建立及应用[D]. 黄原飞.上海海洋大学 2018
[3]基于LC-MS/MS同时测定水体中多种β-内酰胺类抗生素[D]. 聂晓静.大连理工大学 2017
[4]南宁市售鲜肉中四种食源菌的监测及沙门氏菌致病性和耐药性的研究[D]. 吴科敏.广西大学 2017
[5]不同原料比例对厌氧发酵过程中抗生素抗性基因及微生物群落结构的影响研究[D]. 宋雯.西北农林科技大学 2017
[6]重金属铜锌对病原菌及环境细菌耐药性的影响[D]. 史亚楠.广东药科大学 2017
[7]常见柔鱼科鱿鱼品种的分子鉴定技术研究[D]. 叶剑.浙江工商大学 2017
[8]鸡、猪、奶牛源大肠杆菌的耐药性与其I类整合子和质粒相关性研究[D]. 陆光武.扬州大学 2016
[9]水产养殖环境中磺胺类抗生素抗性基因污染的研究[D]. 张骞月.南京农业大学 2016
[10]美洲鳗鲡与其养殖水体细菌的耐药性、抗性基因及整合子的研究[D]. 吴小梅.集美大学 2016



本文编号：3730284