鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因在昆虫细胞内的表达及抗体检测方法的建立

发布时间：2023-01-30 10:44

　　鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是由鸡传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的疾病。IBDV感染鸡群后鸡的法氏囊和B淋巴细胞是病毒攻击的靶标。VP2是IBDV的主要结构蛋白和保护性抗原,是IBDV病毒检测的重要指标,也是鸡群免疫监测的重要材料。本研究利用昆虫表达系统成功表达IBDV DQ株VP2基因,利用获得的VP2重组蛋白建立了IBDV抗体ELISA检测方法。利用昆虫表达系统表达IBDV DQ株VP2基因。首先,将信号肽基因GP67和VP2基因克隆至pFastbac1表达载体上,转化至宿主菌E.coli JM109。经聚合酶链式反应、双酶切和基因序列鉴定后,将阳性克隆命名为pFastbac1-GP67-VP2。将pFastbac1-GP67--VP2转化至宿主菌E.coli DH10Bac。经位点特异性重组、三重抗性筛选和蓝白斑筛选,获得含有GP67蜂毒信号肽和IBDV VP2的重组杆粒。对重组杆粒进行PCR鉴定,将鉴定为阳性的杆粒命名为rBacmid-VP2。其次,采用阳离子脂... 

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
    1.1 IBD的流行病学与致病机理
        1.1.1 IBD的流行病学
        1.1.2 IBDV致病机理
    1.2 IBDV基因组组成
        1.2.1 VP1 蛋白
        1.2.2 VP2 蛋白
        1.2.3 VP3 蛋白
        1.2.4 VP4 蛋白
        1.2.5 VP5 蛋白
    1.3 IBDV VP2 基因在不同表达系统上的表达
        1.3.1 IBDV VP2 基因在杆状病毒表达系统上的表达
        1.3.2 IBDV VP2 基因在毕赤酵母表达系统上的表达
        1.3.3 IBDV VP2 基因在原核表达系统表达上的表达
    1.4 IBDV诊断技术进展
        1.4.1 临床诊断
        1.4.2 实验室诊断
    1.5 选题目的及意义
第二章 IBDV VP2 基因在昆虫细胞内的表达与鉴定
    2.1 试验材料
        2.1.1 菌种和质粒
        2.1.2 仪器设备
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要溶液配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 pFastbac1-GP67 表达载体的构建
        2.2.2 pFastbac1-GP67-VP2 表达载体的构建
        2.2.3 重组杆粒的构建
        2.2.4 重组VP2 蛋白的制备与纯化
    2.3 结果与分析
        2.3.1 pFastbac1-GP67 表达载体的构建结果
        2.3.2 pFastbac1-GP67-VP2 表达载体的构建结果
        2.3.3 rBacmid-VP2 的构建结果
        2.3.4 重组VP2 蛋白的制备与纯化结果
    2.4 讨论
        2.4.1 目的基因的优化
        2.4.2 信号肽和表达载体的选择
        2.4.3 蛋白表达和纯化过程的优化
    2.5 小结
第三章 IBDV抗体检测方法的建立
    3.1 试验材料
        3.1.1 抗原与血清
        3.1.2 试剂与仪器
        3.1.3 溶液配制
    3.2 方法
        3.2.1 IBDV标准阳性血清和阴性血清的制备
        3.2.2 IBDV标准阳性血清和阴性血清的鉴定
        3.2.3 IBDV抗体检测方法的建立
        3.2.4 IBDV有效抗体效价的测定
        3.2.5 母源抗体滴度的测定
    3.3 结果与分析
        3.3.1 IBDV阳性血清的鉴定
        3.3.2 阴性鸡血清的鉴定
        3.3.3 IBDV抗体检测方法的建立结果
        3.3.4 IBDV有效抗体效价的确定
        3.3.5 母源抗体滴度的测定结果
    3.4 讨论
        3.4.1 有效抗体水平标准的选择
        3.4.2 ELISA反应条件的优化
        3.4.3 实验动物的选择
        3.4.5 ELISA结果分析
    3.5 小结
第四章 全文结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]同时检测禽类六种病毒的金标银染可视化基因芯片的构建及初步应用[J]. 向华,杨国淋,曹三杰,黄小波,伍锐,赵勤,文心田,文翼平.  畜牧兽医学报. 2018(12)
[2]gga-miR-142-5p负调控chMDA5抗传染性法氏囊病病毒感染的分子机制[J]. 欧阳伟,潘群兴,钱晶,王晶宇,王晓丽,夏兴霞,诸玉梅,王永山.  中国动物传染病学报. 2018(06)
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[7]鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白可溶性原核表达及免疫原性分析[J]. 李赛赛,郭玉堃,舒静超,曾磊,郭婉莹,郭豫杰.  中国兽医学报. 2017(12)
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[10]鸡非典型传染性法氏囊病的发病特征与防治措施[J]. 董付哲.  中国畜牧兽医文摘. 2016(01)

博士论文
[1]自组装IBDV病毒样颗粒的研制及应用[D]. 王淼.中国农业科学院 2017
[2]VP1蛋白影响鸡传染性法氏囊病毒致病性的分子机制[D]. 高立.中国农业科学院 2014

硕士论文
[1]SUMO系统表达IBDV NB株VP2 S-P可溶性蛋白[D]. 邢瑞林.郑州大学 2018
[2]IBDV主要结构蛋白VP2、VP1原核表达及其ELISA抗体检测试剂盒的研发[D]. 刘婷.广西大学 2016
[3]IBDV双抗体夹心ELISA检测方法的建立和胶体金试纸条的研制[D]. 刘静静.山东农业大学 2013



本文编号：3732988